四种人参三醇组皂苷对小鼠骨髓MSC体外生长的影响及相关实验技术的研究

摘要

研究背景及目的：人参皂苷对骨髓间充质干细胞的药理作用鲜见报道。已有研究表明，人参皂苷的脱糖基化可能与其药理活性密切相关。本部分工作旨在研究人参三醇组皂苷对体外培养条件下小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）增殖的影响，并分析脱糖基化与人参三醇组皂苷药理活性的关系，以期更进一步认识人参皂苷的药理作用机制。 方法：进行小鼠骨髓MSC原代和传代培养，分组在MSC培养体系中加入人参三醇组皂苷Re、Rg1、Rh1、ppt，测定MSC集落形成率和细胞数，自行设计和制作了贴于培养板底部的胶片，此网格用于细胞计数区的定位，用目镜网格计数细胞。目镜网格单元方格的平均细胞计数除以方格的面积，再乘培养孔底面积，从而计算出一个孔的细胞总数。MTT比色试验测定细胞活力，实时定量RT—PCR检测CDK2、cyclinE、p21 mRNA表达水平。 结果：体外培养体系中，人参皂苷Rh1在10μmol/L～20μmol/L的浓度范围内，MSC集落产率显著减低；浓度为20μmol/L时，MSC传代扩增细胞数明显减少；浓度在5μmol/L～20μmol/L范围内，MSC传代细胞的MTT试验吸光值明显低于对照组。ppt为20μmol/L时，MSC集落产率显著减低，MSC传代细胞的MTT试验吸光值明显减小。然而，在人参皂苷Re和Rg1实验组与对照组之间，以上三种实验指标均无明显差异。在培养体系中人参皂苷Re、Rg1、Rh1、ppt为10μmol/L时，MSC传代细胞的cyclin E mRNA表达水平明显下降，而CDK2和p21 mRNA表达水平无明显变化。 结论：以上结果表明，在一定的浓度，人参三醇组皂苷Rh1和ppt能减低小鼠原代骨髓MSC的集落生成能力，抑制MSC传代细胞的增殖，而Re、Rg1对这些细胞的体外增殖无明显影响。这提示人参三醇组皂苷的药理活性可能有赖于其分子某种程度的脱糖基化。人参皂苷Re、Rg1、Rh1、ppt对MSC传代细胞的cyclin E的表达有下调作用，其意义还需进一步研究。

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论文说明：主要缩略词

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第一部分：四种人参三醇组皂苷对小鼠骨髓MSC体外生长的影响

前言

1.1材料与方法

1.2结果

1.3讨论

1.4小结

第二部分 培养板单层贴壁细胞的原位计数方法

前言

2.1材料与方法

2.2结果

2.3讨论

2.4小结

参考文献

攻读学位期间科研成果

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