紫花牡荆素对宫颈癌细胞凋亡及线粒体凋亡途径的影响

摘要

目的：研究紫花牡荆素(Casticin，CAS)诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡作用，探索其诱导凋亡机制是否通过促进活性氧(reactiveoxygenspecies，ROS)生成，进而激活线粒体凋亡途径。评价CAS作为新型宫颈癌治疗药物的潜在价值。
　　 方法：体外培养宫颈癌HeLa细胞和外周血单个核细胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMCs)。用不同浓度的CAS作用HeLa细胞，细胞凋亡ELISA试剂盒检测HeLa细胞组蛋白/DNA碎片；碘化丙啶(PI)染色流式细胞术(FCM)定量分析Sub-G1细胞百分率；DNA琼脂糖凝胶电泳观察细胞DNA梯形条带。caspase比色活性试剂盒检测caspase-3/-9活性；Rh123探针染色流式法检测细胞线粒体膜电位；采用DCFH-DA探针流式细胞术检测细胞ROS生成；Westernblot检测细胞色素c、Bax、Bcl-2、Bcl-xL和XIAP蛋白的表达。
　　 结果：不同浓度CAS处理24h后，HeLa细胞组蛋白/DNA碎片增加(P<0.05)；Sub-G1细胞百分率显着增高(P<0.05)；DNA琼脂糖凝胶电泳法观察到2.0、4.0μMCAS导致HeLa细胞出现典型的DNA梯形条带。CAS处理组caspase-3和caspase-9活性均明显升高(P<0.05)，而活性氧特异性抑制剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)预处理组与相同浓度CAS处理组相比，caspase-3和caspase-9活性均明显下降(P<0.05)；CAS处理组线粒体膜电位明显降低(P<0.05)。经10mMNAC预处理，线粒体膜电位与相同浓度CAS处理组相比明显升高(P<0.05)；CAS处理组ROS明显升高(P<0.05)；Westernblot检测细胞色素c、Bax显着升高(P<0.05)，而Bcl-xL和XIAP蛋白表达水平降低(P<0.05)，但Bcl-2水平没有显着变化。
　　 结论：
　　 CAS以剂量依赖和时间依赖方式诱导宫颈癌HeLa细胞凋亡。
　　 CAS能激活宫颈癌HeLa细胞线粒体凋亡途径。
　　 CAS以剂量依赖方式促进宫颈癌HeLa细胞ROS的生成。
　　 CAS通过促进ROS生成进而激活宫颈癌HeLa细胞线粒体凋亡途径。