紫花牡荆素诱导肝星状细胞凋亡的作用机制

摘要

目的:探讨紫花牡荆素(casticin)促进肝星状细胞(hepatic stellate cell,HSC)-T6凋亡的作用机制.方法:用终浓度为0、0.5、1.0、2.0μmol/L的Casticin作用于HSC-T6,于12、24、48 h后采用MTT法检测HSC-T6增殖抑制率;24 h后收集各组细胞,流式细胞术检测细胞周期及凋亡率;DNA琼脂糖凝胶电泳法检测HSC-T6凋亡;RTPCR法检测促凋亡基因FAS/FASL mRNA及抑凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达;免疫组织化学法检测凋亡蛋白Caspase3的表达.结果:MTT法检测显示,Casticin对HSC-T6有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系;流式细胞仪检测HSC-T6凋亡,发现2.0μmol/L的Casticin作用48 h后,HSC-T6凋亡率达到最大值55.70%±5.56%,各药物组凋亡率与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).DNA琼脂糖凝胶电泳法检测HSC-T6凋亡,显示有特征性的DNA梯度带形成.RT-PCR法检测促凋亡基因FAS/FASL mRNA表达明显上调,而抑凋亡基因Bcl-2 mRNA的表达下调.免疫组织化学法检测凋亡蛋白Caspase3的表达明显增加,当Casticin浓度2.0μmol/L作用48 h,其表达率71.33%±2.68%,与空白对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05).结论:Casticin诱导HSC-T6细胞凋亡的机制可能是通过上调Fas/FasL基因表达,下调Bcl-2,促使线粒体通透性增加,再激活Caspase3蛋白诱发细胞凋亡.