Casticin对小细胞肺癌NCI-H446细胞系LCSCs自我更新及β-catenin表达的影响

摘要

目的:研究紫花牡荆素(Casticin)对人小细胞肺癌NCI-H446细胞系肿瘤干细胞样细胞(Lung cancer stem like cells，LCSLCs)的自我更新能力及β-catenin表达的影响，初步探讨紫花牡荆素抑制肺癌干细胞特性作用机制。
　　 方法:体外培养人肺癌NCI-H446细胞系，采用干细胞条件培养基悬浮培养法富集并得到肺癌球形成细胞，并鉴定作为LCSLCs。肿瘤球形成试验检测LCSLCs的自我更新能力。Western blot分析NCI-H446细胞系肿瘤球形成细胞以及非分选细胞的干细胞生物标志物CD133，CD44蛋白表达状态。本文建立裸鼠皮下移植瘤模型来检测人肺癌NCI-H446细胞系细胞和肺癌球形成细胞的裸鼠皮下成瘤的能力;并进行移植瘤组织切片，HE染色，光学显微镜下检测病理组织学形态。MTT法测定Casticin对LCSLCs增殖活性的影响。肿瘤球形成实验测定Casticin对LCSLCs自我更新的影响。Western blot分析Casticin对LCSLCs的CD133和CD44蛋白表达的影响。Western blot分析对照检测NCI-H446细胞系细胞与LCSLCs的β-catenin蛋白表达以及Casticin对β-catenin蛋白表达的影响。
　　 结果:1.在干细胞条件培养基悬浮培养中，人肺癌NCI-H446细胞系细胞成球生长，形成肺癌球。2.肿瘤球形成试验结果表明人肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞具有自我更新能力。3.与人肺癌NCI-H446细胞系细胞相比，人肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞干细胞标志物CD133和CD44蛋白表达水平更高。4.裸鼠皮下成瘤实验证明了源自人肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞具有高致瘤特性。5.Casticin优先抑制LCSLCs细胞增殖活性。6.Casticin具有抑制LCSLCs自我更新作用。7.Casticin显著下调干细胞标志蛋白CD133和CD44的表达，呈剂量依赖性。8.人肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞高表达β-catenin蛋白，Casticin以剂量依赖方式抑制其β-catenin蛋白表达。
　　 结论:
　　 1.干细胞条件培养基悬浮培养得到的人小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞具有肺癌干细胞特性。
　　 2.多甲氧基黄酮化合物Casticin具有抑制LCSLCs自我更新作用。
　　 3.Casticin抑制LCSLCs自我更新作用与其下调肿瘤干细胞信号分子β-catenin和干细胞标志物CD133、CD44蛋白表达相关。

目录

摘要

1 引言

2 实验材料和方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

3 结果

3．1 干细胞条件培养基悬浮培养获得人小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞

3．2 小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞具有自我更新能力

3．3 小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞高表达干细胞标志物CD133蛋白

3．4 小细胞肺癌NCI-H446细胞肺癌球形成细胞高表达干细胞标志物CD44蛋白

3．5 小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞具有高致瘤性

3．6 Casticin优先抑制LCSLCs细胞增殖活性

3．7 Casticin抑制LCSLCs自我更新

3．8 Casticin下调LCSLCs干细胞标志蛋白CD133和CD44表达

3．9 小细胞肺癌NCI-H446细胞系肺癌球形成细胞高表达β-catenin蛋白

3．10 Casticin抑制LCSLCs的β-catenin蛋白表达

4 讨论

5 结论

参考文献

英文缩略词索引

综述

攻读硕士学位期间的主要成果

致谢

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