灵芝总三萜对鹅膏中毒小鼠所致肝损伤的保护作用研究

摘要

蘑菇中毒主要是由鹅膏肽类毒素所引起，目前尚缺少有效的治疗鹅膏中毒的药物，前期研究表明灵芝具有很好的治疗效果，为此本论文拟探讨灵芝的有效成分——灵芝总三萜对鹅膏毒肽中毒小鼠所致肝损伤的保护作用及其抗氧化机理研究，实验结果如下:
　　1、灵芝总三萜的提取及其纯化:运用二氧化碳超临界提取法进行粗提，灵芝子实体打粉，以95％乙醇作为夹带剂，萃取条件:温度40℃;压力35MPa;耗时2.5小时;CO2流量为35g/min;夹带剂和粉末的体积/重量比为6∶1(mL/g)。超临界萃取率为2.42％。再将超临界提取物进行硅胶柱层析进一步分离，流动相为不同比例的氯仿、甲醇混合溶液。目的产物主要集中在前两个洗脱比例的流动相，其中氯仿∶甲醇比例为98∶2组分所得产物重量为6.333g;氯仿∶甲醇比例为96∶4组分所得产物重量为6.912g。
　　2、灵芝总三萜对鹅膏毒肽中毒治疗预实验:分别设置正常对照组、鹅膏毒肽中毒组、高低剂量灵芝总三萜组、水飞蓟宾组和纯橄榄油组，以确定灵芝总三萜对鹅膏毒肽中毒的治疗效果。灵芝总三萜随机选取高剂量(200mg/kg/day)和低剂量(50mg/kg/day)两个组作为实验组，总三萜溶于食用级橄榄油中。结果表明灵芝总三萜给药组均表现出一定的药效，而最佳剂量还需要接下来的实验来确定。此外纯油组的各项生化指标均于中毒组相比无明显差异，故能排除掉橄榄油可能带来的影响。
　　3、不同剂量灵芝总三萜对α-鹅膏毒肽中毒小鼠的肝损伤保护作用研究。设置正常组、鹅膏毒肽中毒组、纯油组和不同剂量纯化灵芝总三萜处理组（剂量分别为25、50、100、200、400mg/kg/day,橄榄油溶解为悬浊液，灌胃处理）。结果说明灵芝总三萜对α-鹅膏毒肽所致肝损伤的保护效果在一定的范围内呈现剂量的正相关性，并随着剂量的增加（25mg/kg/day到200mg/kg/day），血清和肝匀浆中的各项指标更接近于正常组。当剂量达到100mg/kg/day和200mg/kg/day时，血清中转氨酶活性(ALT、AST)和肝匀浆内各项指标(SOD、CAT、MDA)均与中毒组相比改善最为明显。
　　4、不同给药时间灵芝总三萜对α-鹅膏毒肽中毒小鼠肝损伤保护作用研究。设置正常组、鹅膏中毒组和灵芝总三萜不同时间给药组（依次在注射毒素后0h、1h、2h、3h、4h、5h给药），灵芝总三萜灌胃剂量选择200mg/kg/day。结果表明在中毒之后越早给药，相应的治疗效果越好，即血清中各项酶的指标和肝匀浆中各项生化指标越接近正常组的水平，尤以0小时组的效果最佳，这说明在生活中出现鹅膏菌中毒后尽早送医治疗是至关重要的。
　　5、在α-鹅膏毒肽致死剂量下对正常组、中毒组、灵芝总三萜组和水飞蓟宾组的小鼠存活情况进行统计分析，经120小时观察，正常组小鼠全部存活，中毒组死亡率却高达96.67％，而灵芝总三萜给药组和水飞蓟宾对照组的死亡率则分别为46.67％和56.67％，实验结果表明灵芝总三萜对鹅膏中毒有较好的解毒效果。
　　总之，灵芝总三萜对α-鹅膏毒肽中毒引起的肝损伤表现出有效的保护作用，且呈现出一定的剂量和时效的正相关关系，同时表明灵芝总三萜的抗氧化特性是其具有保护作用的机理之一，这些结果为鹅膏中毒解毒药物的进一步研究开发打下了一定的理论基础。

目录

摘要

1 引言

1．1 鹅膏菌中毒研究进展

1．1．1 α-鹅膏毒肽中毒的主要特征

1．1．2 α-鹅膏毒肽中毒机理分析

1．2 鹅膏菌中毒治疗研究进展

1．2．1 清洗肠胃

1．2．2 促肾排泄

1．2．3 血液灌流

1．2．4 置换血液

1．2．5 药物治疗

1．2．6 肝脏移植

1．3 灵芝研究进展

1．3．1 灵芝多糖

1．3．2 生物碱

1．3．3 多肽及蛋白质

1．3．4 三萜类化合物

1．4 本论文研究的目的和意义

2 灵芝总三萜的分离和纯化

2．1 材料与试剂

2．2 实验仪器

2．3 实验方法

2．3．1 灵芝总三萜的分离

2．3．2 灵芝总三萜的纯化

2．3．3 灵芝总三萜的含量及纯度分析

2．4 实验结果与分析

2．5 讨论

3．灵芝总三萜对α-鹅膏毒肽中毒小鼠所致肝损伤的保护作用研究

3．1 材料和试剂

3．2 实验仪器

3．3 实验方法

3．3．1 预实验：几种物质(水飞蓟宾、高低剂量灵芝总三萜、纯橄榄油)对α-鹅膏毒肽中毒小鼠的治疗作用实验设计

3．3．2 不同剂量灵芝总三萜对α-鹅膏毒肽所致肝损伤的治疗作用实验设计

3．3．3 灵芝总三萜不同给药时间对α-鹅膏毒肽所致肝损伤的治疗作用实验设计

3．3．4 致死剂量下灵芝总三萜治疗后对小鼠的死亡率影响实验设计

3．3．5 肝脏病理学切片观察

3．3．6 统计学分析

3．4 实验结果与分析

3．4．1 预实验结果

3．4．2 不同剂量灵芝总三萜对α-鹅膏毒肽所致肝损伤的保护作用影响

3．4．3 灵芝总三萜不同给药时间对α-鹅膏毒肽所致肝损伤的保护作用影响

3．4．4 致死剂量下灵芝总三萜给药后小鼠死亡情况统计

3．4．5 肝脏组织病理学切片观察

3．5 讨论

参考文献

附录

致谢

声明