黄尾密鲴与翘嘴红鲌杂交F1的主要生物学特征研究

摘要

鱼类远缘杂交是指亲缘关系在种或种以上的两种鱼类之间的杂交，其能有效的整合双亲的优点，可能使杂交后代在外形、生长速度、存活率以及抗病能力等方面表现出杂种优势，因此远缘杂交是一种重要的鱼类遗传育种和性状改良方法。另外，远缘杂交也已被证明是形成多倍体的一种重要方式。本研究在通过将雌性黄尾密鲴(2n=48)和雄性翘嘴红鲌(2n=48)进行亚科间远缘杂交，成功获得鲴鲌杂交F1代的基础上，对杂交后代的DNA含量、染色体数目、外形特征、5SrDNA的结构组成与变异及染色体定位、Sox基因等生物学特征进行了系统研究，主要研究内容如下:
　　1)通过雌性黄尾密鲴与雄性翘嘴红鲌远缘杂交获得了鲴鲌杂交F1代。利用流式细胞仪测定法和外周血细胞培养的染色体倍性检测方法对鲴鲌F1的倍性进行检测，结果表明鲴鲌F1为二倍体(2n=48)。对两年龄的二倍体鲴鲌的可数性状进行了系统分析，结果表明其部分性状偏向于父本或者母本，也有居于父母本之间的，体现出杂交特性，还有较父母本高的。性腺石蜡切片表明雌性二倍体鲴鲌具有正常发育的卵巢。
　　2)对二倍体鲴鲌及其亲本的5SrDNA进行了克隆及测序分析和染色体定位。发现在黄尾密鲴中含有两种大小分别为188bp和221bp的5SrDNA结构单元，分别命名为结构单元Ⅰ和结构单元Ⅱ;翘嘴红鲌中除单元Ⅰ外，还有结构单元Ⅲ(286bp);二倍体鲴鲌除遗传获得结构单元Ⅰ和结构单元Ⅲ外，还衍生出结构单元Ⅳ(212bp)，但并未观察到结构单元Ⅱ。5SrDNA-188bp探针荧光原位杂交实验发现，在鲴鲌及其亲本染色体中期分裂相中明显可见四个信号，两个位于一对最大的亚中部着丝粒染色体上，另一对位于一对亚端部着丝粒染色体上。这些结果表明鲴鲌杂交后代在遗传了亲本大部分5SrDNA结构单元的同时，也发生了5SrDNA结构单元变异。
　　3)参照Sox基因保守的HMG框序列，设计合成一对简并引物对杂交后代及其亲本的全基因组DNA进行了PCR扩增和测序分析，并将二倍体鲴鲌与其亲本Sox基因进行了比较分析。发现黄尾密鲴中有三个Sox片段，Sox1(215bp)，Sox11(215bp)，Sox9(710bp);翘嘴红鲌中有三个Sox片段，Sox1(215bp)，Sox11(215bp)，Sox9(726bp);二倍体鲴鲌中有四个Sox片段Sox1(215bp)，Sox11(215bp)，Sox9(710bp)，Sox9(726bp)，遗传了双亲所有的Sox基因片段。二倍体鲴鲌中Sox9(710bp)和Sox9(726bp)的存在也证明了二倍体鲴鲌的杂交来源。

目录

摘要

第一章 文献综述

1．1 鱼类杂交育种的研究进展

1．1．1 鱼类杂交育种

1．1．2 远缘杂交在鱼类育种上的应用

1．2 5S rDNA及荧光原位杂交(FISH)

1．2．1 5S rDNA的研究现状

1．2．2 5S rDNA在分子标记中的应用

1．2．3 5S rDNA在FISH中的应用

1．3 Sox基因家族的研究进展

1．3．1 Sox基因家族概述

1．3．2 Sox基因家族在杂交鱼中的应用

1．4 本研究的目的和意义

第二章 鲴鲐F1的形成及其育性检测

2．1 材料与方法

2．1．1 试验鱼与杂交试验

2．1．2 外周血细胞核DNA含量测定

2．1．3 外周血细胞培养染色体制备

2．1．4 外形特征测量

2．1．5 性腺发育观察

2．2 结果

2．2．1 外形观察及染色体数目

2．2．2 DNA含量

2．2．3 统计可数性状与可比性状

2．2．4 性腺发育情况

2．3 讨论

第三章 5S rDNA的研究及染色体定位

3．1 材料与方法

3．1．1 材料

3．1．2 全基因组DNA抽提

3．1．3 PCR扩增、克隆、测序

3．1．4 制备鱼类的染色体中期分裂相

3．1．5 探针制备和荧光原位杂交(FISH)

3．2 结果

3．2．1 5S rDNA PCR扩增及测序结果

3．2．2 5S rDNA结构单元分子结构

3．2．3 探针标记结果

3．2．4 染色体定位

3．3 讨论

第四章 鲴鲌F1的Sox研究

4．1 材料与方法

4．1．1 材料

4．1．2 全基因组DNA抽提

4．1．3 PCR扩增、克隆、测序

4．2 结果

4．2．1 二倍体鲴鲔及其父母本Sox基因的HMG框扩增结果

4．2．2 序列比较分析

4．3 讨论

参考文献

附录

致谢

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