脱脂哈蟆油胶囊HPLC色谱指纹图谱研究

摘要

哈蟆油具有“健脾养胃、滋阴补肾、润肺生津”之功效，被称为软黄金，极具开发潜力。由于哈蟆油中胆固醇含量较高，达0.92％，与蛋黄的胆固醇含量相接近，因此不适宜患高血脂症的中老年人服用。脱脂哈蟆油胶囊通过超临界萃取制得，经含量测定，其胆固醇含量为0.08％，大大降低了其胆固醇含量，从而使其使用人群更加广泛。本课题为“脱脂哈蟆油胶囊HPLC 色谱指纹图谱研究”。由于中药成分复杂，仅对某个有效成分进行定性定量分析并不能有效控制其质量，目前指纹图谱已成为国际公认的控制质量的有效手段。本实验旨在通过HPLC法对脱脂哈蟆油胶囊进行研究，确立其色谱条件，建立指纹图谱的共有模式，从而从整体上控制脱脂哈蟆油胶囊的质量。本实验采用系统溶剂提取法对提取溶剂进行考察，选择了甲醇作为提取溶剂；通过正交实验，确定了最佳提取工艺；根据指纹图谱的三维图，确定检测波长为215nm；经过对多种流动相的考察，确定了乙腈－水为其流动相，采用梯度洗脱。通过对色谱条件的摸索及优化，最后确定脱脂哈蟆油胶囊HPLC 指纹图谱的色谱条件为：色谱柱：Kromasil C18(5μm 100àTiANHE? TH 1025 250mm×4.6mm S/N:06L25514)；流动相：乙腈－水梯度洗脱；柱温：30℃；检测波长：215nm；进样量：7μl，运行25min。经方法学验证，精密度、重复性和稳定性良好，相对保留时间和峰面积大于10％的峰的相对峰高RSD 均小于3％，相似度大于0.95，符合指纹图谱要求。在该色谱条件下，通过对十批脱脂哈蟆油胶囊指纹图谱的研究，采用相似度评价软件，建立了脱脂哈蟆油胶囊的HPLC 色谱指纹图谱的共有模式，其中共有峰13个，并在色谱图中标示出酪氨酸峰，为脱脂哈蟆油胶囊质量控制奠定了基础。