便携式POCT分析仪用于DNA和肌红蛋白检测研究

摘要

POCT(point of care testing)分析仪具有快速、便捷、成本低、易于操作等特点，有着广阔的应用前景和发展空间。血糖仪和尿酸仪是目前最为常见的便携式POCT分析仪，但它们往往局限于单一目标物（葡萄糖或者尿酸）的检测，这远远不能满足人们的需求。本文利用酶-DNA复合物催化底物（蔗糖或黄嘌呤）生成葡萄糖或尿酸，使得这两种便携式POCT分析仪与其它检测对象之间建立关联，发展了基于便携式POCT分析仪的DNA和肌红蛋白的检测新方法。具体研究工作如下:
　　 1.基于尿酸仪与黄嘌呤氧化酶-DNA复合物实现DNA的高灵敏检测
　　 合成了黄嘌呤氧化酶-DNA复合物，以p53 DNA和HBV DNA为目标分子，利用尿酸仪发展了DNA检测新方法。当目标DNA存在时，固定化的捕获探针、目标DNA和黄嘌呤氧化酶-DNA复合物三者形成夹心式结构，然后通过黄嘌呤氧化酶催化氧化黄嘌呤生成尿酸。利用尿酸仪检测酶催化生成的尿酸浓度，即可反映目标DNA的浓度。该方法灵敏度高，选择性好，对DNA检测有通用性，其检测下限低至pmol/L。同时，该方法可用于血清样品中DNA的检测，并通过使用微孔阵列式芯片同时检测多个样品。
　　 2.基于血糖仪与蔗糖酶-核酸适配体复合物实现肌红蛋白的高灵敏检测
　　 优化了肌红蛋白核酸适配体的序列，合成了蔗糖酶-核酸适配体复合物，利用血糖仪发展了肌红蛋白检测新方法。该方法利用酶标板表面固定的抗体捕获肌红蛋白，并与蔗糖酶-核酸适配体复合物形成夹心式结构。通过蔗糖酶催化蔗糖生成葡萄糖，可将肌红蛋白的含量与血糖仪的信号值联系起来。该方法利用酶的催化作用实现信号的放大，实现了肌红蛋白的高灵敏检测，其检测下限为50 pmol/L。该方法的选择性较好，可用于血清样品中肌红蛋白的检测。

目录

声明

摘要

本文常用英文缩写对照表

第1章 绪论

1．1 POCT的概述

1．1．1 POCT的定义

1．1．2 POCT的意义

1．2 常见的POCT分析技术

1．2．1 侧向横流检测技术

1．2．2 生物芯片技术

1．2．3 生物传感器技术

1．3 POCT技术的应用

1．3．1 血细胞的检测

1．3．2 蛋白质的检测

1．3．3 核酸的检测

1．3．4 代谢产物和小分子的检测

1．4 “一专多能”——POCT技术的新发展

1．5 本论文的构思

第2章 便携式尿酸仪用于血清中DNA定量检测的研究

2．1 前言

2．2 实验部分

2．2．1 试剂与仪器

2．2．2 缓冲溶液的配制

2．2．3 微孔阵列式芯片的制作与修饰

2．2．4 黄嘌呤氧化酶-DNA复合物的合成及表征

2．2．5 DNA检测的可行性考察

2．2．6 实验条件的优化

2．2．7 目标DNA的检测

2．3 结果与讨论

2．3．1 检测原理

2．3．2 黄嘌呤氧化酶-DNA复合物的表征

2．3．3 可行性分析

2．3．4 DNA杂交时间的影响

2．3．5 催化反应时间的影响

2．3．6 温度的影响

2．3．7 底物浓度的优化

2．3．8 p53 DNA的检测

2．3．9 HBV DNA的检测

2．3．10 血清样品中DNA的检测

2．4 小结

第3章 核酸适配体与便携式血糖仪用于血清中肌红蛋白定量检测的研究

3．1 前言

3．2 实验部分

3．2．1 试剂与仪器

3．2．2 缓冲溶液的配制

3．2．3 蔗糖酶-核酸适配体复合物的合成与表征

3．2．4 肌红蛋白核酸适配体的序列优化

3．2．5 可行性考察

3．2．6 实验条件的优化

3．2．7 肌红蛋白的检测

3．3 结果与讨论

3．3．1 检测原理

3．3．2 肌红蛋白核酸适配体的序列考察

3．3．3 蔗糖酶-核酸适配体复合物的表征

3．3．4 肌红蛋白检测的可行性分析

3．3．5 孵育时间的影响

3．3．6 温度的影响

3．3．7 肌红蛋白的定量检测

3．3．8 肌红蛋白检测的选择性考察

3．3．9 血清样品中肌红蛋白的测定

3．4 小结

结论

参考文献

附录 攻读学位期间所发表的学术论文目录

致谢