PCBP2在病毒诱导肝细胞产生I型干扰素中的作用

摘要

PCBP2是核不均一核糖核蛋白(hnRNP)家族成员之一，能特异性结合富含胞嘧啶RNA片段，在细胞生理过程中发挥着重要的作用，例如参与转录后的调控、与microRNA、蛋白相互作用。PCBP2也是宿主细胞分泌的细胞因子之一，近些年研究PCBP2与病毒之间的相互关系的报道越来越多，发现PCBP2能参与多种病毒RNA的复制过程，还能调控细胞的免疫应答反应。PCBP2影响丙型肝炎病毒(HCV)、新城疫病毒(NDV)病毒RNA的复制已有报道，但是PCBP2在病毒诱导肝细胞产生Ⅰ型干扰素中的具体作用却未见报道。
　　 本文主要探讨了PCBP2在病毒诱导肝细胞产生Ⅰ型干扰素中的作用，首先我们设计了沉默PCBP2基因的shRNA，将其插入到新型载体pSilencer后转染到肝细胞HLCZ01中，成功建立了对PCBP2基因沉默效果在60％-90％左右的稳定细胞系。以此为基础，我们使用了体外合成的的双链RNA试剂poly(I∶C)刺激细胞，结果发现沉默PCBP2，细胞内IFNβ的表达量上调;使用单股负链RNA病毒NDV感染细胞，发现沉默PCBP2，细胞内NDV水平下调，但是IFNβ以及其下游四种干扰素刺激基因ISG12a、ISG56、ISG60以及G1P3的表达量明显上调;最后采用单股正链RNA病毒HCV感染细胞，发现沉默PCBP2可抑制HCV的复制水平，同时促进IFNβ以及ISG12a、ISG56、ISG60以及G1P3的表达水平。由此可见，沉默PCBP2，细胞内病毒量下调，IFNβ表达水平上调，PCBP2负调控病毒诱导肝细胞产生Ⅰ型干扰素。
　　 全球约有1.7亿人因感染HCV而诱发各种肝脏类的疾病，但是目前临床上缺乏有效治疗HCV的药物，因此开发新型有效的抗HCV药物迫在眉睫。目前以PCBP2为靶点的抗病毒性疾病的治疗研究刚刚起步，但已显现出了广阔的前景。本研究表明PCBP2与干扰素抗病毒作用负相关，因此我们可以将PCBP2作为研究的靶点分子，尝试研发新型的抗HCV药物，这能为病毒性疾病的治疗提供一个新视野。

目录

声明

摘要

第1章 绪论

1．1 前言

1．2 丙型肝炎病毒简介

1．2．1 丙型肝炎病毒基因组结构和和蛋白功能

1．2．2 丙型肝炎病毒生活周期

1．2．3 丙型肝炎病毒的传播途径与流行现状

1．2．4 丙型肝炎病毒治疗药物

1．3 新城疫病毒简介

1．3．1 新城疫病毒的基因组结构

1．3．2 新城疫病毒研究进展

1．4 宿主细胞抗病毒反应以及病毒逃逸免疫应答反应

1．4．1 宿主细胞抗病毒反应

1．4．2 病毒逃逸免疫应答反应

1．5 PCBP2简介

1．5．1 PCBP2特点以及基因组结构

1．5．2 PCBP2的功能

1．5．3 PCBP2与病毒

1．6 本课题研究思路和研究意义

第2章 稳定沉默PCBP2细胞系的建立

2．1 前言

2．2 材料与方法

2．2．1 实验材料

2．2．2 实验方法

2．3 实验结果

2．3．1 pSilencer-neo-3．1-H1-PCBP2-shRNA质粒的获得以及鉴定

2．3．2 稳定沉默PCBP2的细胞系的获得以及鉴定

2．4 小结与讨论

第3章 PCBP2在NDV诱导肝细胞产生Ⅰ型干扰素中作用

3．1 前言

3．2 材料与方法

3．2．1 实验材料

3．2．2 实验方法

3．3 实验结果

3．3．1 沉默PCBP2后poly(I：C)刺激肝细胞干扰素表达上升

3．3．2 PCBP2负调控干扰素抗NDV病毒反应

3．4 小结与讨论

第4章 PCBP2在HCV诱导肝细胞产生Ⅰ型干扰素中的作用

4．1 前言

4．2 材料与方法

4．2．1 实验材料

4．2．2 实验方法

4．3 实验结果

4．3．1 丙型肝炎病毒的纯化与检测

4．3．2 HCV感染肝细胞HCLZ01诱导PCBP2的表达水平下调

4．3．3 PCBP2负调控干扰素抗HCV病毒反应

4．4 小结与讨论

结论与展望

参考文献

附录 攻读学位期间发表论文

致谢