茶多酚对AOM/DSS诱导高脂饮食小鼠结直肠癌的影响

摘要

结直肠癌(Colorectal cancer，CRC)是世界第三大常见恶性肿瘤，病死率排在第四位，CRC患者逐年增加，并且在我国有成为第三大致死癌症的趋势。CRC的形成是多因素、多步骤的过程，炎症性肠病（inflammatory bowel disease，IBD）和家族遗传史是 CRC最大的致病风险因素，与普通人相比 IBD患者更容易患CRC。炎症反应能促进肿瘤的发生发展，其不同免疫细胞、细胞因子、和其他免疫介质在肿瘤的起始、形成、发展和转移的过程中扮演非常重要的角色。目前针对CRC的治疗主要是以手术治疗为主，辅助以化疗、放疗，但是效果欠佳。CRC中晚期治疗效果更差，转移是导致结直肠癌患者死亡的重要原因，而且临床上一半以上的患者在进行结直肠癌手术根治之前就已经出现了转移。因此，寻找一种有效的口服天然药物，对CRC的预防和治疗具有重要意义。茶多酚(TP)是茶叶中的一类多酚物质。中国人历来就有几千年的饮茶历史，研究表明，茶多酚在体外对多种癌细胞增殖、转移具有抑制作用。
　　本文采用四周龄 SPF级雄性 BALB/c小鼠作为实验材料，将 BALB/c小鼠随机分为正常组、高脂组、低脂模型组、高脂模型组和茶多酚治疗组，采用三次循环腹腔注射氧化偶氮甲烷(azoxymethane， AOM)以及饮用2％葡聚糖硫酸钠(dextran sulfate sodium，DSS)建立结肠炎相关结直肠癌（colitis associatedcolorectal cancer，CAC）模型。为更加接近人体自发性CAC形成过程，小鼠在造模的同时并采用高脂饲料长期饲养。模型建立后在分子水平和个体水平对 CRC模型及茶多酚干预效果及饮食因素的影响进行探讨，具体工作如下：
　　1、结肠炎相关性结直肠癌模型的建立。通过AOM/DSS单次处理建立小鼠急性炎症模型，反复多次处理并使小鼠长期采食高脂饲料（60 kcal%）模拟自发性IBD相关性CRC发生的全过程。结果表明，AOM/DSS单次处理后小鼠出现腹泻、便血、消瘦等症状，采食高脂饲料的小鼠比采食低脂饲料的小鼠其疾病活动指数(Disease activity index，DAI)要高，高脂饮食一定程度上加重肠道炎症的发生。实验周期结束AOM/DSS处理的小鼠结直肠上均可见到大小不一的肿瘤，说明CAC模型成功建立。
　　2、高脂饮食、炎症及结直肠癌相互关系研究。通过 qRT-PCR及病理切片观察来比较各组小鼠炎症反应及肿瘤形成的状态。实验结果表明，在高脂组、低脂模型组、高脂模型组和茶多酚治疗组结直肠组织切片观察中，均可见到炎症细胞浸润，高脂模型组中还可明显见到腺体不典型增生。各组炎症程度与肿瘤发生个数成正比，说明炎症反应促进了肿瘤的形成。
　　3、Wnt信号通路活化情况研究。本实验通过qRT-PCR实验检测Wnt信号通路下游靶基因C-myc及Cox-2和Western Blot实验检测Wnt信号关键组分p-GSK-3β和β-catenin的表达水平，来检测 Wnt信号通路的活化情况。结果发现炎症反应越强β-catenin胞内积累越多，其下游靶基因表达也上调。表明炎症反应促进了Wnt信号通路的活化。
　　4、茶多酚抗炎抗癌功效研究。在 CAC建立过程中，茶多酚治疗组采用0.1%茶多酚水溶液饮食干预。与低脂模型组和高脂模型组相比，茶多酚治疗组其促炎因子相对表达量均下调，而抑炎因子相对表达量均上调。茶多酚治疗组β-catenin细胞内的积累量明显低于高脂模型组和低脂模型组，而Wnt信号下游靶基因相对表达量也下调。以上结果说明，茶多酚一定程度上抑制了炎症反应的发生，进而抑制了Wnt信号通路的活化。

目录

声明

本文所用英文缩写词表

第1章 绪 论

1.1结直肠癌的研究背景

1.2炎症性肠病

1.3 Wnt信号通路与结直肠癌

1.4 茶多酚

1.5 结直肠癌动物模型的建立

1.6 本研究拟开展的工作

第2章 模型的建立与分析

2.1 引言

2.2实验材料及仪器

2.3 实验方法

2.4 实验结果

2.5小结

第三章 茶多酚抗炎抗癌功效研究

3.1 引言

3.2 实验材料及仪器

3.3 实验方法

3.4 实验结果

3.5 实验小结

第4章 Wnt信号通路分析

4.1 引言

4.2 实验材料及仪器

4.3 实验方法

4.3 实验结果

4.4 实验小结

结论与展望

参考文献

附录攻读学位期间所发表的学术论文目录

致谢