水稻osvdac基因RNAi载体的构建及其在转基因植株中的表达分析

摘要

电压依赖性阴离子通道(voltage-dependentanionchannel,VDAC)广泛存在于真菌、植物和动物中。VDAC主要在调节线粒体与细胞质之间物质运输和能量调节以及在线粒体介导的细胞凋亡中具有重要作用。
　　在水稻基因组中,已发现至少有8个编码VDAC的基因。本研究采用酶切酶连方法针对其中5个水稻osvdac基因(osvdac4、osvdac5、osvdac6、osvdac7和osvdac8)构建RNA干涉表达载体,其中osvdac4和osvdac7干涉表达载体成功转化水稻品种日本晴,获得了转基因阳性植株。以osvdac7基因下调的转化植株为材料,利用荧光定量PCR分析技术,研究了osvdac7基因下调条件下,其它osvdac家族成员的表达水平变化。主要结果如下:
　　1.以pMCG161构建了5个水稻osvdac基因的9个RNA干涉表达载体,即osvdac4-5、osvdac4-3、osvdac5-5、osvdac5-3、osvdac6-3、osvdac7-5、osvdac7-3、osvdac8-5和osvdac8-3。
　　2.用9个RNA干涉表达载体分别转化水稻品种日本晴,只有osvdac4-3、osvdac7-5和osvdac7-3的遗传转化成功获得了阳性转基因植株。荧光定量PCR分析表明,其被干涉的相应基因均有不同程度的下调表达趋势。
　　3.采用实时荧光定量PCR,分析了osvdac7基因下调的RNA干涉植株中8个osvdac基因表达水平的变化。结果显示,osvdac7基因的干涉下调与osvdac3有平行下调表达的趋势,除osvdac6的表达水平有一定的上调趋势外,其它vdac家族成员变化不明显。

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第一章 文献综述

1.1 VDAC蛋白

1.2 RNAi技术

1.3 本研究的主要内容、目的及意义

第二章 5个osvdac基因RNAi表达载体的构建

2.1 前言

2.2 材料和试剂

2.3 实验方法

2.4 结果与分析

2.5 讨论

第三章 干涉表达载体对水稻日本晴的遗传转化

3.1 前言

3.2 材料与试剂

3.3 实验方法

3.4 结果与分析

3.5 讨论

第四章 水稻osvdac7基因下调植株中8个osvdac的表达水平分析

4.1 前言

4.2 材料和试剂

4.3 实验方法

4.4 结果与分析

4.5 讨论

参考文献

致谢

附录一：相关试剂及培养基的配制方法

附录二：相关激素和抗生素的配制

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参与的科研课题及学术活动