藏药肝宁胶囊的提取工艺及质量标准研究

摘要

慢性肝病包括病毒性肝炎、非酒精性脂肪肝、酒精性肝病、代谢性肝病、药物性肝病、免疫性肝病、肝硬化和肝癌等常见病。在我国发病率高，并呈上升趋势。由于其病程长，迁延难愈，已经成为全球公共卫生关注的焦点之一。目前，国内外采用先进的科学技术及医学方法对该病进行了大量的临床和实验研究，然而效果并不十分满意。因此，开发一种新的慢性肝病治疗药物已经迫在眉睫。藏药肝宁胶囊处方源于藏医临床经验方，由金腰草、川西獐牙菜、甘青青兰、波棱瓜子、止泻木子、鸭嘴花等12味藏药组成，在西藏地区广泛用于治疗各种肝胆疾病。原处方为散剂，生产工艺落后，质量标准偏低，使用和携带不便。本研究旨在确保原方疗效与特色的前提下，对该方进行系统的制备工艺和质量标准研究，以期开发出一种制备工艺合理，质量稳定可控的创新药物，减轻肝病患者的痛苦。
　　方中主药金腰草的化学成分报道较少，药效物质基础尚不明确。本课题对金腰草的化学成分进行了研究，并采用一测多评法测定了其中主要化学成分的含量。结果从中分离得到11个化合物，分别为：对羟基苯乙酮、Chrysosplenoside D、Pendulin、Chrysosplenoside B、Chrysosplenol D、葫芦素D、金腰素乙、喷杜素、ArveninⅠ和2β-glucosyloxy-16,20,22-trihydroxy-9-methyl-19-norlanosta-5,24-diene-3,11-dione。此外还得到1个新化合物。这11种成分均为首次从该植物中分离得到。其中Penduletin，Chrysosplenoside D，Pendulin和Chrysosplenoside B的含量分别为5.84、3.51、2.76和10.52 mg?g-1。为后期的提取工艺设计奠定了基础。
　　川西獐牙菜为方中另一味主药。现行藏药标准中对川西獐牙菜的质量控制仅有―性状和―鉴别项的规定，不能有效地控制其质量。为了更好地控制药材及制剂的质量，本文建立了川西獐牙菜中主要活性成分獐牙菜苷和芒果苷的含量测定方法：流动相为甲醇(A)-0.8％冰醋酸水溶液(B)，梯度洗脱（0~30 min，20%A→45%A；30~60 min，45%A→100%A），流速为1.0 mL?min-1，检测波长254 nm，柱温30℃，进样量10μL。结果獐芽菜苷在质量浓度23.24~69.72μg?mL-1，芒果苷在质量浓度110.12~330.36μg?mL-1范围内线性关系良好。测得川西獐牙菜中獐芽菜苷的含量为1.32 mg?g-1，芒果苷含量为5.85 mg?g-1。该方法简便可靠，重现性好，为提取工艺的研究提供了可靠的检测指标，也为肝宁胶囊的质量标准研究提供了定量依据。
　　本研究根据处方中各味药材有效成分的理化性质，初步设计了4种提取工艺，通过急性四氯化碳肝损伤模型，考察不同提取工艺对药效学的影响。同时，对不同提取工艺的浸膏得率，芒果苷转移率，总齐墩果酸含量和总黄酮含量进行了测定。综合各项指标结果，筛选出藏药肝宁胶囊的提取工艺。随后，设计正交试验对所选工艺进行优化，最终确定藏药肝宁胶囊的制备工艺如下：金腰草、川西獐牙菜、甘青青兰、波棱瓜子、止泻木子和鸭嘴花6味药材采用14倍量65%乙醇回流提取2次，每次2 h；所得提取物与其他药材粉末混合均匀，加入可溶性淀粉45%，70%乙醇制软材，过20目筛制粒，60~70℃干燥，过20目筛整粒，再加入5%硬脂酸镁调节流动性，装入胶囊，即得。
　　为了保证肝宁胶囊的质量，本文对其进行了质量标准研究。按照《中国药典》（2015年版）胶囊剂项下规定，对肝宁胶囊的水分、崩解时限、装量差异等进行了检查，均符合药典相关规定；此外，对方中的甘青青兰、鸭嘴花和波棱瓜子进行了薄层鉴别研究，斑点分离较好，阴性对照无干扰，证明所选方法专属性强；采用高效液相色谱法对肝宁胶囊中獐芽菜苷和芒果苷进行了含量测定，最终限定肝宁胶囊每克含獐芽菜苷不得少于0.10mg，芒果苷不得少于0.46 mg。
　　综上所述，藏药肝宁胶囊处方组成独特，具有创新的理论依据；制备工艺合理，具有生产可行性；质量标准简便可靠，重复性好；具有良好的临床应用前景。

目录

声明

第1章 绪 论

1.1 慢性肝病的研究现状

1.2 藏药的研究概况

1.3 本研究的目的及意义

第2章 金腰草的化学成分及含量测定研究

2.1 前言

2.2 金腰草的化学成分研究

2.3 一测多评法测定金腰草中主要化学成分的含量

2.4 结论

第3章 川西獐牙菜中2种有效成分的含量测定

3.1前言

3.2 实验部分

3.3 讨论及小结

第4章 肝宁胶囊的提取工艺研究

4.1 前言

4.2 仪器与材料

4.3 处方的组成

4.4 提取工艺的筛选

4.5 提取工艺的优化

4.6 成型工艺

第5章 肝宁胶囊的质量标准研究

5.1 前言

5.2 材料与仪器

5.3 性状

5.4 鉴别

5.5 检查

5.6 含量测定

5.7 肝宁胶囊质量标准草案

结论

本课题的创新点

参考文献

致谢

附录A 攻读学位期间所发表的学术论文目录

附录B 新化合物图谱