高渗溶液抑制钙敏感介导的小鼠气管平滑肌收缩

摘要

本文主要探究高渗盐水舒张小鼠气管的作用机理。首先我们将乙酰胆碱预收缩的小鼠气管给以梯度的高渗NaCl溶液，小鼠气管剂量依赖性舒张。综合考虑高渗溶液对小鼠气管活性的影响以及舒张程度，我们用5％NaCl溶液进行后续实验，它能有效的舒张正常和哮喘小鼠气管以及人类支气管。去除气管上皮，5%NaCl溶液仍然能使其舒张，因此，在后续的研究中保留气管上皮。为弄清楚高渗NaCl溶液引起的气管舒张与气管平滑肌细胞内钙的关系，我们测量气管平滑肌细胞内钙。高渗溶液处理后细胞内钙浓度升高，而不是降低，说明该舒张不与平滑肌细胞内钙离子直接相关，可能与钙敏感通路相关。而用10μM Y-27632阻断钙敏感通路中的RhoA，高渗引起的舒张幅度减弱，说明RhoA介导了高渗溶液诱导的气管舒张。用Western blotting测量肌球蛋白调节轻链LC20的磷酸化水平发现，高渗处理使LC20的磷酸化水平降低。总之，实验结果表明，高渗溶液通过降低钙敏感，最终导致气管舒张。

目录

声明

第1章 绪 论

1.1 哮喘

1.1.1 哮喘的诱因及发病机制

1.1.2 哮喘的临床治疗

1.2 高渗在临床上的应用

1.2.1 高渗溶液在临床的一般应用

1.2.2 高渗溶液在治疗肺部疾病的应用

1.3 高渗溶液舒张气管的相关研究

1.4 本研究构想

1.4.1 研究目的

1.4.2 研究内容

第2章 实验材料与方法

2.1 实验材料

2.1.1 实验动物

2.1.2 主要试剂及溶液的配制

2.1.3 实验仪器及设备

2.2 肌张力实验方法

2.2.1 调试肌肉张力实验系统

2.2.2 小鼠气管环的分离

2.2.3 处理气管及上样

2.3 气管平滑肌细胞的分离

2.3.1 气管平滑肌的获取

2.3.2 单细胞的分离

2.3.3 细胞内钙浓度的测定

2.4 急性哮喘模型的制作

2.5 Western blotting测P-LC20的水平

2.5.1 组织总蛋白的提取

2.5.2 Western blotting

2.6 数据分析

第3章 实验结果

3.1 高渗溶液对预收缩的小鼠气管有舒张作用

3.2 高渗NaCl溶液的舒张作用不与细胞内钙直接相关

3.3 高渗NaCl溶液的舒张作用与钙敏感相关

第4章 讨 论

总结

参考文献

致谢

附录A 研究生期间发表的文章