极端嗜盐古菌HalobacteriumZP-6中β-酮脂酰辅酶A硫解酶的研究

摘要

该文利用多相分类方法从艾丁湖分离到的菌株ZP-6的分类地位进行了研究.从菌株ZP-6中纯化了β-酮脂酰辅酶A硫解酶,纯化了347倍后,收率可达9﹪.分子量为80+8kDa,由两个分子量相同的亚基(43+2kDa)组成.最后适硫解反应pH值为7.9.钾和钠离子可以维持此酶的活性和稳定性,并且在饱和度的氯化钾或氯化钠溶液中可达最高活性和最大稳定性.增加溶液中氯化钾的浓度, 可增加此酶的耐热性.在低温下此酶极易失活,镁离子对此酶的硫解反应有强烈的抑制作用.经测定,此酶N-末端的14个氨基酸残基为TDARVAGVGLTHFG.与菌株HalobacteriumNRC-1中acaB1基因所编码蛋白N-端一致.使用acaB1基因的5'和3'末端作为引物.该酶基因被克隆和测序,利用软件AntheprotV4.0,研究人员预测了此酶的各种理化参数和二级结构.同58种非嗜盐生物的硫解酶氨基酸序列相比,嗜盐硫解酶的氨基酸组成不但含有较多的负电荷氨基酸和较少的强疏水氨基酸,而且含有较小的氨基酸.对58种不同来源的硫解酶氨基酸序列进行了比较,对整个硫解酶家族的分子进行进行了分析.结果表明,各硫解酶依作用的底物特异性形成不同的硫解酶簇.菌株ZP-6中的硫解酶位于具有支链底物特异性的硫解酶簇.因此可以认为菌株ZP-6中的硫解酶具有支链脂类代谢功能.

目录

一.极端嗜盐古菌

参考文献

二.极端嗜盐酶的研究

参考文献

三.硫解酶的研究

参考文献

本实验的目的和意义

第一节菌株ZP-6的鉴定

一.前言

二.材料和方法

三.结果和讨论

1.菌株ZP-6和Halobacterium salinarum的表型和生理特征

2.分子鉴定

3.小结

第二节菌株Halobacterium salinarumZP-6中β-酮脂酰辅酶A硫解酶的纯化和基本特性

一.前言

二.材料和方法

三.结果和讨论

1.硫解酶的纯化过程

2.盐浓度对硫解酶活性和稳定性的影响

3.酸碱度和Mg2+离子对硫解酶酶活的影响

4.分子重量和亚基组成的确定

5.酶的硫解反应动力学

6.硫解酶N-末端氨基酸序列分析

参考文献(第一节和第二节)

第三节菌株ZP-6中硫解酶基因的克隆测序和对此基因编码蛋白理化及结构性质的预测分析

一.前言

二.材料和方法

三.结果和讨论

1.PCR产物的测序

2.极端嗜盐硫解酶所对应氨基酸序列的特性分析

3.不同硫解酶蛋白氨基酸组成的统计对比分析

第四节硫解酶家族的分子进化研究和对极端嗜盐硫解酶生理功能的分析

一.前言

二.材料和方法

三.结果和讨论

1.硫解酶序列对比

2.硫解酶家族的分子进化

3.对本实验所纯化硫解酶在生物胞内功能的探讨

4.从acaB2基因引发的思考

参考文献

博士期间文章目录

附件

致谢