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第1章绪论
1.1生物骨的组成
1.2钙磷降解材料研究的意义
1.3钙磷降解材料降解机理及细胞的作用
1.4成骨细胞在骨构建和修复中的作用
1.5成骨细胞非胶原蛋白在骨修复和构建中的作用
1.6生命大分子在生物矿化中的作用
1.7论文设计思路和路线
第2章成骨细胞的分离、培养及纯化
2.1实验部分
2.1.1仪器与试剂
2.2实验方法
2.2.1成骨细胞的分离和原代培养
2.2.2成骨细胞的纯化和传代
2.2.3植块法分离、培养和纯化成骨细胞
2.2.4连续植块法分离成骨细胞
2.2.5成骨细胞生物学特性分析
2.3实验结果
2.3.1形态学观察
2.3.2成骨细胞生长曲线
2.3.3化学染色
2.4讨论
2.5本章小结
第3章成骨细胞与材料的相互作用
3.1仪器和试剂
3.1.1实验仪器
3.1.2试剂
3.2实验方法
3.2.1成骨细胞和钙磷材料的体外培养
3.2.2成骨细胞和材料作用后的MTT测试
3.2.3与材料作用后成骨细胞的镜下观察
3.2.4材料作用后的成骨细胞中基因体外扩增
3.3实验结果
3.3.1体外培养后形态学观察
3.3.2成骨细胞MTT分析
3.3.3材料作用后成骨细胞相关基因RT-PCR分析
3.4讨论
3.4.1 β-TCP和成骨细胞的相互作用
3.4.2 β-TCP对成骨细胞相关基因mRNA表达水平的影响
3.4.3影响总RNA提取的因素
3.5小结
第4章大鼠骨粘连蛋白的体外诱导、表达及纯化
4.1实验器材与试剂
4.1.1实验器材
4.1.2试剂
4.2实验方法
4.2.1大鼠骨粘连蛋白表达质粒pHX201/ON的构建与鉴定
4.2.2重组蛋白的诱导和表达
4.2.3重组蛋白条件优化
4.2.4蛋白质的提取和纯化
4.2.5蛋白染色,脱色条件的优化
4.3实验结果
4.4.1 pHX201/ON表达载体的构建与鉴定
4.4.2细菌IPTG诱导生长曲线绘制
4.4.3诱导条件的优化
4.4.4蛋白的提取和纯化
4.4.5染色和脱色条件优化
4.4讨论
第5章结论与展望
参考文献
附录
致谢