云木香、豨莶和乳浆大戟三种药用植物的抗肿瘤活性研究

摘要

目的：
　　尽管新型癌症治疗剂的发现和开发已取得显著进展，但癌症仍然是世界上第二大死亡原因。目前，治疗癌症的主要方法有三种，分别是手术，放疗和化疗。另外，从中药中获取疗效高，毒副作用低的药物的研究已成为热点。本研究的目的是研究和探讨脱氢木香内脂(DE)对胃癌细胞的作用机制，以及豨莶和乳浆大戟抗肝癌的作用机制。
　　方法：
　　本课题，从中南民族大学提取物库中筛选了400种中草药，发现云木香，豨莶和乳浆大戟抗肿瘤活性较高。采用高效液相色谱分离提纯DE，通过水蒸馏制备豨莶和乳浆大戟韵精油，并且通过氢谱、碳谱和GC-MS鉴定了它们的主要化学成分。通过MTT法测定和分析生长抑制，Hoechst33258染色观察凋亡细胞的核形态学变化。流式细胞术被用于检测细胞凋亡、细胞周期和活性氧(ROS)水平。通过Western Blot检测靶蛋白的表达。
　　结果：
　　使用不同浓度的化合物或提取物处理癌症细胞，然后评价其细胞活力，增殖，细胞凋亡，活性氧和抗凋亡蛋白的水平。本研究表明，他们以剂量或者时间依赖的方式抗细胞凋亡。DE降低了GRP78，Bcl-2，pPI3K和pAKT的表达，增加了caspases-3，caspases-7，caspases-9和caspases-12的表达，促进了胃癌细胞的凋亡。豨莶精油(SPEO)以剂量依赖的方式显著抑制HepG2细胞的增殖。SPEO激活一系列凋亡蛋白，增加了Bax，caspase-3和caspase-9的表达水平，并降低bcl-2的表达水平。乳浆大戟精油(EEEO)以剂量和时间依赖的方式降低细胞活力，升高ROS水平，激活Bax，caspase-3和caspase-9，抑制bcl-2，最终诱导HepG2细胞凋亡。
　　结论：
　　实验表明，在多个生物学方面，DE通过PI3K/Akt信号通路，线粒体通路和内质网通路在抗胃癌的过程中效果非常明显。这一发现提供了新的思路，近一步了解了DE在战斗癌症中的作用。SPEO在体外显示出抗肝癌细胞活性，部分通过激活线粒体途径诱导HepG2细胞凋亡。实验结果表明EEEO通过ROS产生诱导HepG2细胞的凋亡，其可能是由线粒体途径介导的。

目录

声明

摘要

第1章 脱氢木香内酯抗胃癌的机制研究

1．1 前言

1．2 实验材料与仪器

1．2．1 实验试剂

1．2．2 实验仪器

1．3 实验方法

1．3．1 药材的提取

1．3．2 脱氢木香烃内酯的提取方法

1．3．3 样品的制备

1．3．4 细胞培养

1．3．5 细胞活力的测定

1．3．6 细胞形态学变化及Hoechst 33258染色

1．3．7 Annexin V-FITC检测细胞凋亡

1．3．10 数据统计

1．4 实验结果

1．4．1 SPEO的化学成分分析

1．4．2 MTT法检测细胞的活力

1．4．3 细胞形态学观察

1．4．4 DE诱导的细胞凋亡

1．4．5 DE对细胞周期的影响

1．4．6 DE通过线粒体通路诱导SGC-7901细胞的凋亡

1．4．7 DE通过内质网(ER)通路诱导SGC-7901细胞的凋亡

1．4．8 DE通过PI3K／Akt通路诱导SGC-7901细胞的凋亡

1．5 讨论

参考文献

第2章 豨莶提取物抗肝癌机制的研究

2．1 前言

2．2 实验材料与方法

2．2．1 实验试剂

2．2．2 实验仪器

2．2．4 GC-MS分析豨莶精油

2．2．5 细胞培养

2．2．6 细胞活力的检测

2．2．7 细胞形态学变化及Hoechst 33258染色

2．2．8 流式细胞术检测细胞凋亡及细胞周期分布

2．3．1 SPEO的化学成分分析

2．3．2 MTT法检测细胞的活力

2．3．3 细胞形态学观察

2．3．4 SPEO诱导的细胞凋亡

2．3．5 SPEO对细胞周期的影响

2．3．6 SPEO对凋亡相关蛋白的表达的影响

2．4 讨论

参考文献

第3章 乳浆大戟提取物抗肝癌机制的研究

3．1 前言

3．2 实验材料与方法

3．2．1 实验试剂

3．2．2 实验仪器

3．2．3 乳浆大戟精油的制备

3．2．4 GC-MS分析豨莶精油

3．2．5 细胞培养

3．2．6 细胞活力的检测

3．2．7 Hoechst 33258染色

3．2．8 流式细胞术测调亡

3．2．9 活性氧水平的检测

3．2．10 Western Blot检测相关凋亡蛋白

3．2．11 数据统计

3．3 实验结果

3．3．1 EEEO的化学成分分析

3．3．2 MTT法检测细胞的活力

3．3．3 细胞形态学观察

3．3．4 PI检测EEEO诱导的细胞凋亡

3．3．5 细胞内活性氧的变化

3．3．6 EEEO对凋亡相关蛋白的表达的影响

3．4 讨论

参考文献

第4章 结论与展望

第5章 药用植物抗肿瘤研究进展(综述)

5．1 作用机制

5．1．1 细胞凋亡相关基因调控

5．1．2 半胱氨酸蛋白酶(Caspase)家族的激活

5．1．3 Fas和FasL激活信号转导路径

5．1．4 细胞超微结构改变

5．1．5 对肿瘤细胞周期的影响

5．1．6 对端粒酶活性的影响

5．1．7 机体免疫调节

5．2 研究分析中药化合物

5．3 与化疗联合使用

5．4 总结

参考文献

致谢

攻读硕士学位期间发表的论文

攻读硕士学位期间参加的科研项目