阻塞性睡眠呼吸暂停合并高血压炎症反应及氧化应激反应变化的研究

摘要

阻塞性睡眠呼吸暂停综合征(obstructive sleep apnea syndrome，OSAS)是一种由睡眠呼吸障碍引起低氧血症，并导致一系列临床症状的疾病，慢性间歇低氧（chronic intermittent hypoxia，CIH）是发病机制的关键。近年来，我们发现此疾病的患病率居高不下，并可以引起其他系统的多种并发症，其中以心血管疾病最多见。大量研究发现，炎性反应及氧化应激反应在OSAS合并高血压的发生、发展中举足轻重:间歇低氧（intermittent hypoxia，IH）刺激机体引发系统性炎症、氧化应激、内皮功能损伤、经常性觉醒导致的交感神经激活等反应，从而导致高血压。目前研究表明，OSAS患者的CIH合并高血压的状态，会引起体内炎性反应、氧化应激反应的增强，标志炎症因子及氧化应激反应的细胞因子如:IL-6、TNF-α、CRP、NO、NOS等水平也随之变化，但很少有研究关注不同人群其炎症反应及氧化应激反应的程度及相关因子的水平。客家人是广州地区具有代表性的原住居民，由于文化传统及饮食习惯具有独特性及地域性，对其与非客家人群炎性及氧化应激指标的研究可以反映相同地域罹患相同疾病的不同人群之间的差异。那么动物实验不可或缺，本实验通过大鼠造模来模拟CIH诱发高血压的过程，并通过检测实验组与对照组大鼠体内炎性因子和氧化应激反应部分标志物的水平，来研究炎症反应和氧化应激反应的程度;再以细胞水平进一步研究，得出结论。 第一部分 阻塞性睡眠呼吸暂停合并高血压炎症反应及氧化应激反应变化的研究 目的:随着医学的发展，有研究发现近年来OSAS合并高血压的患病率高于往年。目前很少针对罹患OSAS合并高血压的不同人群的炎症反应及氧化应激反应进行相关研究，鉴于客家人有较为独特的生活和饮食习惯，具有地域代表性，可以反映相同地域罹患相同疾病的不同人群之间的差异。本实验通过对客家与非客家人群的临床资料、炎性因子、氧化应激因子的比较，探讨不同人群合并高血压的OSAS患者的炎症反应及氧化应激反应的差异性。通过对炎性因子水平的监测就可以为评估患者病情严重程度和预后提供有效途径;为OSAS合并高血压的预防、治疗提供理论依据。 方法:应用ELISA方法对客家人与非客家人群合并高血压的OSAS患者血清中IL-6、TNF-α、CRP及NO、NOS水平进行检测，通过统计学方法得出结果、结论。 结果:非客家人群患者的平均SAP相对高于客家人群患者，差异具有统计学意义(P＜0.05);而DAP、MAP和HR的平均水平与客家人群组没有明显的差异;从炎性反应和氧化应激反应方面分析，非客家人群患者的IL-6和TNF-α的平均血清水平相对高于客家人群患者，差异具有统计学意义(P＜0.05);而CRP的平均血清水平略高于客家人群患者，差异不具有统计学意义;非客家人群患者的血清NO平均水平明显低于客家人群，差异具有统计学意义(P＜0.05);而血清NOS平均水平略低于客家人群，但是差异不具有统计学意义。 结论:在非客家人群中，患有OSAS合并高血压的患者，其SAP相对较高，而客家人群OSAS合并高血压患者的SAP相对较低，这可能与客家人健康的生活方式及独特的饮食文化有关。炎症因子水平和代表氧化应激水平指标的高低，直接反映机体炎症及氧化应激反应严重程度，这就表明，非客家人群患者罹患OSAS合并高血压时，体内诱发的炎性反应和氧化应激反应相对比客家人群患者更为严重。但两种反应与细胞因子之间的相关性如何，需要第二部分实验来验证。 第二部分 慢性间歇低氧诱导大鼠高血压与炎性反应、氧化应激反应的关系研究 目的:OSAS患者的CIH状态可以通过诱发体内炎症、氧化应激、内皮功能损伤等使患者同时罹患高血压，故炎症反应及氧化应激反应也会较正常对照组人群增强。两种反应与细胞因子之间的相关性也是本实验研究的一个方面。动物实验不可或缺。本实验通过动物模型的构建，检测大鼠的血压、心率、炎症因子、氧化应激反应因子的水平，来探讨CIH诱导后大鼠以上指标水平的变化、炎性反应的严重程度与炎症因子水平的相关性和氧化应激反应程度与氧化应激相关因子水平的相关性，为临床研究OSAS合并高血压发生机制提供理论依据。 方法:建立大鼠CIH诱导高血压模型，应用ELISA方法对CIH组和对照组大鼠血清中IL-6、TNF-α、CRP及NO、NOS水平进行检测，通过统计学方法得出结果、结论。 结果:CIH组的大鼠的心率、血压、体内的炎性因子IL-6、TNF-α和CRP的水平较对照组明显升高;差异具有统计学意义(P＜0.05);而体重增长速度、氧化应激反应相关因子NO和NOS的水平较对照组降低，差异具有统计学意义(P＜0.05);CIH诱导的大鼠体内IL-6、TNF-α和CRP水平与血压、心率呈正相关，而NO、NOS与血压、心率呈负相关。 结论:CIH的诱导能够减缓大鼠体重的增长速度，可以诱导大鼠罹患高血压，引起大鼠体内炎性反应和氧化应激反应的增加。炎性反应与炎性因子呈正相关，氧化应激反应与NO、NOS水平呈负相关，并且大鼠体内炎性反应和氧化应激反应会随着病程的延长而逐渐加重。 第三部分 慢性间歇低氧诱导高血压大鼠淋巴细胞炎症与氧化应激水平的变化 目的:OSAS与心血管疾病密切相关，同时OSAS是心血管疾病的独立危险因素。由文献中得知淋巴细胞与机体的多种免疫应激反应相关。在以往的动物试验中，也证实了高血压大鼠存在大量淋巴细胞和单核细胞的激活。本实验通过分离CIH诱导高血压大鼠和对照组大鼠的淋巴细胞，并检测对比淋巴细胞内IL-6、TNF-α、CRP、NO和iNOS水平的变化，来探讨CIH诱导高血压对大鼠淋巴细胞炎性反应和氧化应激反应水平的影响。 方法:从在第二部分已经成功建立的CIH诱导高血压的大鼠模型上提取淋巴细胞，用WB方法对细胞中IL-6、TNF-α、CRP及NO、iNOS水平进行检测，通过统计学方法得出结果、结论。 结果:CIH组大鼠淋巴细胞的活力、纯度普遍底于对照组，而凋亡度明显高于对照组;CIH合并高血压组大鼠淋巴细胞的IL-6、TNF-α、CRP、NO及iNOS的水平都明显高于对照组，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 结论:CIH状态不仅能诱导大鼠罹忠高血压，也能够降低淋巴细胞的活力、纯度，并能提高CIH组淋巴细胞的凋亡度;CIH诱导可以加重淋巴细胞内炎症反应的强度和氧化应激反应的强度。 第四部分 慢性间歇低氧诱导高血压大鼠血管内皮细胞炎症与氧化应激水平的变化及与淋巴细胞炎症与氧化应激的相关作用 目的:CIH的诱导能够促进OSAS患者血管内皮细胞与炎症细胞相互作用，血管内皮细胞是炎性相关因子的靶细胞，同时也是淋巴细胞毒性攻击的靶细胞，通过检测CIH诱导高血压大鼠的血管内皮细胞中IL-6、TNF-α、CRP、及NO、iNOS、eNOS的水平，探讨CIH条件下，血管内皮细胞中的炎性反应和氧化应激反应的程度;通过大鼠的淋巴细胞与内皮细胞共培养，探讨淋巴细胞对内皮细胞的炎性反应和氧化应激反应程度的影响。 方法:对由第二部分对照组大鼠身上提取得来的淋巴细胞及内皮细胞，进行不同时间的CIH诱导，先用WB方法测定CIH诱导下内皮细胞中的IL-6、TNF-α、CRP及NO、iNOS、eNOS水平;再与常氧下淋巴细胞、内皮细胞进行共培养，用ELISA方法对培养液中的IL-6、TNF-α、CRP及NO、iNOS、eNOS水平进行检测，通过统计学方法得出结果、结论。 结果:当大鼠内皮细胞处于CIH环境中时，细胞内的炎性相关因子IL-6、TNF-α和CRP、iNOS水平会上升，NO、eNOS呈现下降的趋势;当CIH大鼠的淋巴细胞与CIH大鼠内皮细胞共培养时，共培养上清中的炎性反应相关因子IL-6、TNF-α和CRP均有所升高，而氧化应激反应相关因子NO和NOS水平则有所降低。 结论:CIH诱导高血压大鼠内皮细胞的炎症反应和氧化应激反应程度上升，CIH诱导下大鼠的淋巴细胞和内皮细胞的炎症反应和氧化应激反应会产生相互影响。

目录

声明

摘要

缩略词表

前言

第一部分客家人与非客家人群合并高血压的OSAS患者的炎症与氧化应激比较

1．研究背景与研究目的

2．资料与方法

3．结果

4．讨论

5．实验研究对象

6．小结

第二部分慢性间歇低氧诱导大鼠高血压与炎性反应、氧化应激反应的关系研究

1．研究背景与研究目的

2．材料与方法

3．结果

4．讨论

5．小结

第三部分慢性间歇低氧诱导高血压大鼠淋巴细胞炎症与氧化应激水平的变化

1．研究背景与研究目的

2．材料与方法

3．结果

4．讨论

5．小结

第四部分慢性间歇低氧诱导高血压大鼠血管内皮细胞炎症与氧化应激水平的变化及与淋巴细胞炎症与氧化应激的相关作用

1．研究背景和研究目的

2．材料与方法

3．结果

4．讨论

5．小结

全文总结

参考文献

综述 慢性间歇低氧诱导高血压机制的研究现状

攻读学位期间发表文章情况

致谢