橄榄苦苷对HK--2细胞缺糖缺氧损伤的保护作用

摘要

目的: 探究橄榄苦苷对HK-2细胞缺糖缺氧损伤的保护作用并探讨其可能的作用机制。 方法: 从美国ATCC细胞库购买人肾小管上皮细胞(HK-2)，到货后迅速于光学显微镜下观察形态、密度、有无污染。确定无异常后，放置在培养箱中4-6h。细胞缺氧复氧模型的制备:按照95％N2，5％CO2的通气比例调节三气培养箱，模拟体外缺氧环境来处理HK-2细胞。在缺氧24小时后，复氧不同的时间，用光学显微镜观察细胞表型以明确模型的制备条件。按照不同的处理方式将细胞分组:正常对照组（Control组）、单纯缺氧24h复氧3h组(IR组）和缺氧24h复氧3h后加不同浓度的橄榄苦苷(分别为10、50、100、200μmol/L)干预组。用CCK-8检测各组细胞的A450值，与正常组比较算出细胞的存活率，Hoechst染色检测各组细胞的凋亡情况，Westem Blot法测定B淋巴细胞瘤-2(B-cell lymphoma-2，Bcl-2)、Bcl-2相关x蛋白(Bcl-2associated X protein，Bax)的蛋白表达量。 结果: 1.细胞缺氧24h，复氧不同时间后，细胞表型呈现出一定的时间依赖性。但缺氧24h复氧3h即足够模拟体外的肾缺血再灌注损伤; 2.CCK-8检测结果显示，橄榄苦苷能够提高HK-2细胞在缺糖缺氧环境下的细胞存活率; 3.Hoechst33258染色后显微镜下可见细胞核出现核固缩、染色质凝聚和凋亡小体形成等凋亡相关改变，并呈现出一定的浓度依赖性，这说明橄榄苦苷可减少缺糖缺氧损伤引起的细胞凋亡，降低细胞凋亡率; 4.Western blot结果显示，橄榄苦苷能够增加细胞Bcl-2蛋白的表达，降低Bax蛋白的表达，差异具有统计学意义(P＜0.05)。 结论: 橄榄苦苷对K-2细胞的缺糖缺氧损伤具有一定的保护作用，其作用机制可能与其抑制细胞凋亡有关。

目录

声明

摘要

引言

1．实验材料

2．主要试剂的配制

3．实验步骤

结果

4．1 橄榄苦苷对HK-2细胞存活率的影响

4．2 Hochest检测细胞凋亡情况

4．3 橄榄苦苷对HK-2细胞Bcl-2和Bax蛋白表达的影响

讨论

全文总结

参考文献

综述:缺氧对自噬的双重作用调节的最新研究进展

攻读硕士期间的科研成果

致谢