从NMDA受体途径探讨HCN通道抑制剂ZD7288对脑缺血的保护作用

摘要

目的：运用大脑中动脉线栓法建立大鼠缺血2h再灌注22h脑缺血损伤模型，从NMDA受体途径探讨超极化激活环核苷酸门控阳离子(HCN)通道抑制剂ZD7288对脑缺血的神经保护作用。
　　方法：
　　(1)缺血前2h经侧脑室给予不同剂量的ZD7288，分别为5μg、10μg、15μg、20μg、25μg，缺血2h再灌注22h后，进行行为学评分和TTC染色脑梗死体积计算，以确定ZD7288对脑缺血神经保护作用的最佳有效剂量；
　　(2)不同时间点经侧脑室给予最佳有效剂量的ZD7288，缺血2h再灌注22h后，通过行为学评分和TTC染色脑梗死体积计算来确定ZD7288对脑缺血保护的时间窗；
　　(3)运用免疫印迹法检测HCN1及HCN2在缺血大鼠皮层、海马的表达情况；
　　(4)运用免疫组织化学方法检测NMDAR1、p-NMDAR1、NMDAR2A、p-NMDAR2A、NMDAR2B、p-NMDAR2B、NMDAR3A、NMDAR3B在缺血大鼠皮层、海马中的表达情况。
　　结果：
　　(1)5μg和10μg ZD7288组对缺血2h再灌注22h脑损伤无明显保护效应，15μg和20μg具有神经保护效应（P﹤0.05），25μg效果最为显著。
　　(2)缺血16h为ZD788脑缺血保护的时间窗，缺血前2h预防性给药的治疗效果最为明显。
　　(3)免疫印迹结果显示：HCN1、HCN2在皮层、海马模型组的表达较假手术组均有上调，ZD7288可逆转以上变化。
　　(4)免疫组化结果显示：a. HCN1主要表达于胞膜，与假手术组比较，HCN1在模型组的皮层、海马CA1及DG区表达增强，ZD7288可明显抑制这一现象；模型组及ZD7288组在CA3区均无明显变化。 b. HCN2主要表达于胞膜，与假手术组比较，HCN2在模型组的皮层、海马CA1区、CA3区及DG区表达增强，ZD7288可明显抑制这一现象。 c. NR1主要表达于神经纤维突起，与假手术组比较，NR1在模型组海马CA1区表达减弱，在皮层、海马CA3区、DG区增强，ZD7288可明显抑制这一现象。p-NR1主要表达于胞膜，与假手术组比较，p-NR1在模型组皮层、海马CA1区表达增强，ZD7288可明显抑制这一现象；模型组及ZD7288组在海马CA3及DG区的表达均无明显变化。d. NR2A表达于胞膜上，海马DG区无表达，与假手术组比较，NR2A在模型组海马CA1区表达减弱，在皮层、海马 CA3区表达增强，ZD7288可明显抑制上述现象。p-NR2A主要表达于胞浆，海马DG区无表达，与假手术组比较，p-NR2A在模型组海马CA1、CA3区表达增强，在皮层表达减弱，ZD7288可以明显抑制上述现象。e. NR2B主要表达胞体突起，胞膜上也有少量表达，与假手术组比较，NR2B在模型组皮层、海马CA1区表达减弱，在海马CA3、DG区表达增强，ZD7288可明显抑制上述现象。p-NR2B主要表达于胞浆、胞核，与假手术组比较，p-NR2B在模型组皮层、海马CA3区、DG区表达增强，ZD7288可明显抑制这一现象，模型组及ZD7288组在海马CA1区的表达无明显变化。f. NR3A主要表达于胞浆，与假手术组比较，NR3A在模型组皮层、海马CA1区、CA3区、DG区表达减弱，ZD7288可明显抑制这一现象。g. NR3B主要表达于胞浆、胞核，海马CA3区无表达。与假手术组比较，NR3B在模型组皮层、海马CA1区、DG区表达减弱，ZD7288可明显抑制这一现象。
　　结论：HCN通道抑制剂ZD7288对脑缺血2h再灌注22h大鼠具有神经保护作用，且时间窗达到16h，这一作用可能是通过调节HCN1/HCN2，NMDAR1/p-NMDAR1， NMDAR2A/p-NMDAR2A，NMDAR2B/p-NMDAR2B，NMDAR3A/NMDAR3B的表达来实现。

目录

声明

英文缩略词表

引言

材料与方法

1.1 材料

1.2 实验方法

结果

1.1 ZD7288对缺血2h再灌注22h脑损伤的神经保护作用及有效剂量

1.2 ZD7288对脑缺血损伤神经保护的时间窗

1.3 ZD7288对大鼠缺血皮层、海马组织中HCN1与HCN2蛋白表达的影响

1.4 ZD7288对大鼠脑组织HCN及NMDA各亚基表达的影响

讨论

小结

参考文献

综述:超极化激活环核苷酸门控阳离子通道在脑缺血及其认知功能障碍中的作用

后记

附录：攻读硕士学位期间发表的部分学术论著