低温冻存食蚊罗索线虫的初步研究

摘要

为了研究在低温条件下保存食蚊罗索线虫，以及研究其实际应用和进一步研究该类线虫抗逆性分子机理，就二甲亚砜(DMSO)、甘油和海藻糖三种保护剂及其不同浓度对食蚊罗索线虫感染期幼虫低温保存后复苏率和感染力的影响及对成虫复苏率的影响进行了初步研究。本文首次采用海藻糖应用于线虫学领域作为食蚊罗索线虫冷冻保护剂并取的良好效果；探讨的直接降温和分步降温方法适宜该线虫的冷冻保存。该项研究结果可为冷冻状态下保存线虫种质资源研究提供方法参考，同时也可为进一步研究该类线虫抗逆性分子机理及其他生物个体的冷冻保存及分子生物学的研究提供有效的参考。在利用索线虫防治害虫等方面，该实验结果也具有一定的应用价值。

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1文献综述

1.1冷冻保存研究概况

1.2线虫保存研究进展

1.2.1线虫低温冷藏保存研究进展

1.2.2线虫液氮保存研究进展

1.2.3线虫胁迫脱水保存研究进展

1.2.4食蚊罗索线虫低温保存研究进展

2材料和方法

2.1材料

2.1.1寄主来源

2.1.2线虫来源

2.1.3保护剂

2.1.4设备

2.2方法

2.2.1样品处理

2.2.2降温

2.2.3复苏

2.2.4除保存剂

2.2.5培育

2.2.6镜检

2.2.7复苏率的计算

2.2.8感染力的测试

2.2.9统计学处理

3结果与分析

3.1降温速率和冰点测定

3.2-20～-10℃低温对幼线虫的影响

3.3不同浓度的保护剂在不同的降温速率条件下对幼线虫的影响

3.4在-80～-70℃条件下不同冻存时间对幼线虫的影响

3.5在-80～-70℃条件下混合保护剂对幼线虫的影响

3.6液氮保存对幼线虫的影响

3.7在-20～-10℃条件下对食蚊罗索线虫成虫的影响

4讨论

4.1复苏温度对线幼虫影响

4.2保存温度的选择

4.3保护剂浓度的选择

4.4影响复苏率的因素分析

4.5冷冻保存对幼虫感染毒性的影响

参考文献

附 录

致 谢