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第一章前言
1.1肺炎链球菌概述
1.1.1肺炎链球菌致病机理
1.1.2肺炎链球菌耐药性研究进展
1.2肺炎链球菌HMGS和HMGR概述
1.2.1肺炎链球菌HMGS和HMGR
1.2.2甲羟戊酸途径
1.2.3 HMGS和HMGR作用机理
1.3 HMG-CoA合成酶和还原酶抑制剂
1.3.1 HMG-CoA合成酶抑制剂研究进展
1.3.2 HMG-CoA还原酶抑制剂研究进展
1.4现代抗生素药物研究开发的特点与趋势
1.4.1抗生素药物的现状调查
1.4.2重要性及存在问题
1.4.3现代抗生素药物开发趋势
1.5立题依据及研究意义
第二章重组肺炎链球菌HMGS克隆表达与动力学研究
2.1引言
2.2实验材料
2.2.1菌株和质粒
2.2.2生化试剂及抗生素
2.2.3 工具酶
2.2.4常用储存液
2.2.5常用缓冲液
2.2.6培养基
2.2.7 Ni-NTA亲和层析用缓冲液
2.2.8定点突变试剂
2.3实验方法
2.3.1肺炎链球菌培养
2.3.2肺炎链球菌基因组DNA的提取
2.3.3肺炎链球菌HMGS基因特异性引物的设计
2.3.4 PCR扩增
2.3.5重组载体构建与鉴定
2.3.6重组蛋白的原核表达与SDS-PAGE分析
2.3.7定点突变PCR与检测
2.3.8转化感受态细胞
2.3.9重组肺炎链球菌HMGS表达条件的优化
2.3.10 Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质
2.3.11酶活性测定
2.3.12动力学分析
2.4结果与分析
2.4.1肺炎链球菌基因HMGS基因克隆及原核表达
2.4.2重组表达质粒pET-HMGS的定点突变及鉴定
2.4.3重组肺炎链球菌HMGSm表达条件的优化
2.4.4重组HMGSm蛋白的分离纯化
2.4.5重组肺炎链球菌HMGS活力测定及动力学研究
2.5讨论
第三章 肺炎链球菌HMGR基因克隆表达、多抗制备及特性研究
3.1引言
3.2实验材料
3.2.1菌株和质粒
3.2.2生化试剂及抗生素
3.2.3 工具酶
3.2.4常用培养基和缓冲液
3.2.5 Ni-NTA亲和层析用缓冲液
3.2.6 ELISA用缓冲液
3.2.7 Western blot用缓冲液
3.3实验方法
3.3.1肺炎链球菌HMGR基因特异性引物的设计及PCR扩增
3.3.2克隆载体pMD-HMGR的构建
3.3.3重组表达质粒pET-HMGR的构建及原核表达
3.3.4 Ni-NTA亲和层析柱分离纯化蛋白质
3.3.5多克隆抗体的制备及效价测定
3.3.6 Western blot分析
3.3.7酶活性检测方法及动力学分析
3.3.8 HMGS和HMGR功能研究
3.3.9统计学分析
3.4结果与分析
3.4.1肺炎链球菌HMGR基因克隆及原核表达
3.4.2重组肺炎链球菌HMGR的分离纯化
3.4.3多克隆抗体的制备及免疫学活性鉴定
3.4.4重组肺炎链球菌HMGR活力测定及动力学研究
3.4.5 HMGS和HMGR功能研究
3.5讨论
第四章 HMGS和HMGR同源模建及在抗生素药物筛选中的应用
4.1引言
4.2实验材料
4.2.1药物与试剂
4.2.2 HMGR筛药反应体系
4.3实验方法
4.3.1同源模建
4.3.2分子动力学优化
4.3.3竞争性抑制剂筛选方法的建立
4.4实验结果
4.4.1肺炎链球菌HMGS同源模建
4.4.2肺炎链球菌HMGR同源模建及分子动力学模拟
4.4.3肺炎链球菌重组HMGR在新抗生素药物筛选中的应用
4.5讨论
全文总结
参考文献
博士期间发表的论文
致谢
华中师范大学;