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杂交水稻品种鉴定的SNP研究及东乡野生稻两个NBS序列的分析

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前言

1我国杂交水稻出口状况

2假冒伪劣杂交稻种危害

3杂交水稻种子检验标准和品种鉴定的方法

3.1杂交水稻种子检验标准

3.2杂交水稻品种鉴定技术及其研究进展

3.3 SNP(单核苷酸多态性)及其检测方法

4东乡野生稻在抗病育种中的利用现状和前景

5水稻抗病性分子生物学

5.1水稻的R基因

5.2防卫反应基因和系统获得抗性

5.3抗病基因的克隆及结构分析

5.4植物-病原菌相互作用的研究

6本研究的目的和意义

材料和方法

1供试水稻材料

2试剂仪器

3试验方法

3.1种子的催芽及栽培

3.2培养基及溶液的配制

3.3 DNA提取

3.4引物和探针的设计

3.5 PCR反应

3.6 PCR产物电泳分析

3.7克隆和转化

3.8克隆片段的测序和同源性分析

3.9实时荧光PCR检测方法的建立

实时荧光PCR检测威优46的结果

1总DNA提取结果

2引物的扩增结果

2.1 ITS区的扩增结果

2.2 primer3和primer4扩增cob基因的电泳结果

3 ITS区和COB基因测序分析

3.1 ITS区测序和比对

3.2 cob基因测序和比对

4实时荧光PCR检测

两个NBS同源序列的测序和分析结果

1两个NBS同源序列扩增后的电泳结果

1.1 primer5和primer6扩增后的电泳结果

1.2 primer7和primer8的扩增结果

2 NBS同源序列的测序分析

2.1 primer5和primer6扩增的NBS同源序列比对

2.2 primer7和primer8扩增的同源序列比对分析

讨论

1 ITS区扩增引物的设计

2关于核酸提取

3关于水稻ITS和MTDNA在SNP研究中的价值及SNP的优缺点

4关于实时荧光PCR

4.1影响探针检测灵敏度的因素

4.2假阳性和假阴性问题的克服

4.3荧光PCR检测的优点及不足

5用总DNA研究MTDNA多样性的可能性

6设计非简并引物进行PCR扩增调查东乡野生稻抗病基因资源的可行性

7水稻抗病分子机理研究展望

结论和创新点

参考文献

致谢

个人简历

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摘要

本文简述了杂交水稻的出口状况,假冒伪劣杂交稻种的危害,回顾了各种杂交水稻种子纯度鉴定的方法及其优缺点,东乡野生稻在抗病育种中的利用现状。重点介绍了SNP的特点、发现和检测方法,实时荧光PCR、TaqMan探针的原理以及水稻抗病性分子生物学研究进展。  本文研究说明,东乡野生稻中存在这两个抗病基因NBS同源序列,对这两个序列的分析将为东乡野生稻抗病基因的分离、抗病分子机理的揭示、抗病育种以及对普通野生稻抗病基因的进一步研究提供基础。

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