天蓝色链霉菌A3（2）中两个nrs同源基因的功能初步分析

摘要

链霉菌复杂的形态分化过程是链菌研究热点之一.天蓝链霉菌基因组计划的完成,为形态及生理分化发育的研究提供了大量有用的信息.该研究根据天蓝色链霉菌基因组计划测出的序列,对两个可能与形态分化及生理分化起负调节作用的nrs周源基因,通过基因中断或置换,表型观察和胞内互补及定点诱变等方法来确定它们的功能及bldA的关系.首先,利用已构建的一系列基因中断（置换）结构对M145染色体上相对应的基因进行中断（置换）,试图寻找bldA调节分化的靶基因.用Southern杂交的方法验证双交换的发生.观察双交换菌株表型,大多在各种培养基上与野生型菌株M145无明显的形态学差异只有SC5H1.40c和SC5H1.41的基因中断菌株ZH1与野生型菌株M145在SFM上表现出差异,即能过量产生放线紫红素.这种表型能被含有完整的两个基因的整合载体pHZ2543互补,而不能被只含有一个SC5H1.40c的整合型载体pHZ2533互补.然后,构建了只中断SC5H1.40的基因中断结构pHZ2531,用接合转移的方法导入M145,得到的接合转移子与ZH1表型一致,命名为ZH2为出发菌株,松弛培养筛选Am<'s>的后代,发现它们的表型都恢复到野生型的水平,即不再过量产生放线紫红素.因此,我们初步认定SC5H1.40是一个放线紫红素合成的负调控基因.

目录

摘要

Abstract

缩略语

第一章文献综述

1.1链霉菌简介

1.1.1链霉菌复杂时空分化调节

1.1.2链霉菌是工业微生物中最有应用价值的类群之一

1.2天蓝色链霉菌与链霉菌基因组计划

1.2.1模式链霉菌-天蓝色链霉菌的抗生素生物合成的遗传学

1.2.2天蓝色链霉菌的形态分化

1.2.3链霉菌基因组计划

1.3 b/dA参与形态分化和生理分化的调控

1.3.1一种稀有tRNA的调控地位

1.3.2细胞外信号级联系统对气生菌丝形成起始的作用

1.4本研究的目的和意义

第二章材料与方法

2.1菌株和质粒

2.1.1菌株

2.1.2质粒

2.2方法

第三章结果与分析

3.1基因置换(中断)的基本原理

3.2应用基因中断(置换)技术对含有TTA的基因中断

3.2.1 SC1F2.20的功能分析

3.2.2 SC8D9.07的功能分析

3.2.3 SC10A5.18的功能分析

3.2.4 SCE9.30的功能分析

3.2.5 SCQ11.13的功能分析

3.2.6 SC5H1.40c的功能分析

3.3.SC5H1.40c可能是一个抗生素产生的负调节基因

3.3.1基因置换菌株的表型观察

3.3.2基因置换菌株互补实验

3.3.3 SC5H1.40c的突变克隆

3.3.4 ZH2回复突变的筛选

3.3.5单独的SCSH1.40c不能互补ZH1的表型

3.3.6 SC5H1.40c作用机制的讨论

3.4对SCD1 7.06c功能的初步探索

3.4.1 SCD17.06c的置换尝试

3.4.2基因中断载体pHZ2535的构建

3.4.3基因中断菌株的筛选

3.4.4 nrsA的定点诱变

3.4.5定点诱变基因nusA*在各种拷贝条件下对J1700产孢表型的影响

第四章讨论与展望

参考文献

致谢