Bt转基因结球甘蓝的遗传分析和检测

摘要

结球甘蓝(Brassica olerecea var. capitata)是中国的一种重要蔬菜,栽培面积已达几十万公顷.生产上结球甘蓝虫害发生相当严重,造成了产量和品质的损失.为害结球甘蓝的主要害虫和鳞翅目的昆虫,其中主要包括菜粉蝶和小菜蛾等.由于在已有的种质资源中很难找到可用的抗虫材料这使得蔬菜常规抗虫育种受到了限制.利用基因工程技术手段培育抗虫蔬菜新品种是农业发展的一个重要方向.基因工程技术不仅安全有效而且投资少、见效快、特异性杀灭害虫和污染环境.植物基因工程为抗性育种提供了一种有效的方法.人们已从细菌中分离得到苏云金芽孢杆菌(Bacillus thuringiensis)毒蛋白基因(Bt).其蛋白产物对鳞翅目昆虫具有特异的毒杀作用而对高等动物和人无害.因此,将Bt基因转入结球甘蓝而获得抗虫材料而成为可能.该研究内容主要涉及转化获得转基因甘蓝,对已获得的卡那霉素抗性植株的分子检测,转化植株的抗虫鉴定,同时对外源基因在转化植株自交后代的遗传分离情况进行了研究.取得的主要研究结果如下:1.10mg/L-15mg/L的卡那霉素(Kanamycin, Km)可以有效抑制

目录

摘 要

ABSTRACT

缩写词表

1前言

1.1植物抗虫基因工程研究进展

1.1.1 Bt基因

1.1.2蛋白酶抑制剂基因

1.1.3外源凝集素基因

1.1.4特异性神经毒素

1.1.5双价或多价抗虫基因

1.2结球甘蓝的遗传转化研究进展

1.3课题研究内容

2材料与方法

2.1实验材料

2.1.1植物材料

2.1.2细菌材料

2.1.3部分试剂来源

2.1.4质粒DNA提取液配方

2.1.5样品DNA提取液配方

2.1.6培养基

2.2实验方法

2.2.1甘蓝下胚轴对Km敏感性

2.2.2 Cef对甘蓝下胚轴再生的影响

2.2.3共培养时间与农杆菌浸染

2.2.4结球甘蓝转化

2.2.5转基因甘蓝植株的分子检测

2.2.6转基因植株的抗虫性初步分析

2.2.7转基因植株子一代的遗传分析

3结果与分析

3.1甘蓝下胚轴对KM的敏感性

3.2头孢霉素对结球甘蓝下胚轴再生的影响

3.3共培养时间对甘蓝转化植株再生的影响

3.4转基因植株的分子检测

3.4.1 T0代转化植株的检测分析

3.4.2 T1代转基因植株的检测分析

3.5转基因植株的抗虫性初步分析

3.5.1 T0代转化植株对小菜蛾的抗性初步分析

3.5.2 T1代转化植株的小菜蛾幼虫抗性初步分析

3.6转基因在子一代的遗传分离

4 讨论

4.1转基因植物遗传现象的初步探讨

4.2转基因的表达

4.3卡那霉素筛选

4.4抗虫实验

4.5 PCR方法检测转基因的遗传分离

4.6转抗虫基因蔬菜的安全性评价

4.7不足及展望

参考文献

图版

致谢