鲢早期性分化与性转及两个雌核发育系近交F代遗传多样性的研究

摘要

鲢(Hypophthalmichthys molitrix)是中国淡水主养鱼类之一,它具有食物链短,易饲养,成本低等优点,在中国淡水养殖业中占有很大的比例.由于目前国内缺乏选种和保种技术,天然资源受到破坏,再加上近亲繁殖,使鲢种质退化.长江水产研究所一直致力于雌核发育鲢的选育种工作,目前结合分子标记初步建立了2个人工雌核发育系.但是雌核发育诱导成功只是完成了选育优良品系的第一步,还要解决繁殖后代和保持亲本的优良性状的问题.2002年5至12月采用组织学方法对鲢早期性分化进行了研究,以便掌握鲢早期性腺分化规律,为人工性转提供依据;2002年6月至2003年12月对鲢进行了性转诱导,以探讨性转及繁殖后代的可行性;2002年12月到2003年4月用RAPD技术对两个雌核发育系鲢近交F<,1>的遗传多样性进行分析,从分子水平上检验建立的雌核发育系近交后代遗传性状的稳定性.主要结果如下:1.鲢雌核发育I系近交F<,1>代在出膜后35天出现性腺分化,先分化出卵巢,卵巢腔的出现为分化的最早标志.卵巢的横切面呈长条形,精巢的横切面呈椭圆形.出膜后3个月,鲢性腺中主血管的位置也可作为早期性腺分化的解剖学标志,卵巢的主血管靠近腹侧中央,精巢的主血管靠近背侧.在光镜下难以根据性原细胞的形态和大小区分卵原细胞和精原细胞.5月龄的卵巢开始形成蓄卵板,此时的卵巢为I期卵巢;7月龄的卵巢已形成完整的蓄卵板,卵巢处在I期向II期的过渡时期.60天的精巢在靠柄部形成输精管的雏形;7月龄的精巢处于I期,横切面为卵圆形.2.以14日龄的鲢鱼苗为材料进行性转实验,分析用每kg含17α-甲基睾丸酮30mg、15mg和5mg的饲料连续投喂43天后,将鲢转入池塘中进行常规饲养,当性腺发育到Ⅱ期时,采用组织学方法鉴定了个体性别,比较不同剂量雄性激素对鲢的性转效果.结果表明:15mg剂量组的雄性检出率达到68.8﹪,5mg剂量组的雄性检出率为54.8﹪,空白对照组的雄性检出率为43.5﹪;而30mg剂量组的雄性检出率只有35.3﹪,反而低于对照组.因此,饲料中添加适量的17α-甲基睾丸酮有助于提高鲢的雄性率.3.采用RAPD技术对两个人工雌核发育系鲢近交F<,1>遗传距离、遗传相似度及群体遗传多样性进行分析,用普通鲢和鲢作对照.结果表明:GSC Ⅰ、Ⅱ系近交F<,1>系内个体间平均遗传相似度分别为0.9722、0.9807,高于对照鲢和鲤的0.9546、0.8727;两系近交F<,1>的遗传多样性指数分别为0.0629、0.0529,低于对照鲢和鲤的0.1018和0.2132,表明GSCⅠ、Ⅱ系系内近交的F<,1>保持了较高的纯度.UPGMA和NJ系统树清晰反映了两个系近交F<,1>与对照组个体间在相互关系.26个随机引物的RAPD扩增结果显示,5个引物OPG04、OPG17、OPP01、OPM11、OPM16可以扩增出区分两个系近交F<,1>的特异标志带.

目录

文摘

英文文摘

第一章文献综述

1.1鱼类的性别决定和性别分化

1.1.1鱼类的性别决定

1.1.2鱼类的性别分化

1.1.3影响鱼类性别分化的因素

1.2鱼类的性转

1.3 RAPD技术在鱼类遗传育种上的应用

1.3.1 RAPD技术在鱼类标记鉴定和遗传作图中的应用

1.3.2 RAPD技术在研究鱼类的系统发育和亲缘关系中的应用

1.3.4 RAPD技术用于群体遗传多样性研究

1.4本研究的意义

第二章鲢早期性分化与性转

2.1材料与方法

2.1.1雌核发育系F1的获得

2.1.2性分化取样

2.1.3性转及取样

2.1.4性腺组织学方法

2.2结果与分析

2.2.1 GSC I系近交F1性腺分化

2.2.2性转化试验

2.3.讨论

2.3.1关于鱼类的性别分化

2.3.2关于鱼类性转

第三章两个雌核发育系鲢近交F1代的遗传多样性

3.1材料与方法

3.1.1材料来源

3.1.2试剂

3.1.3仪器

3.1.4试验方法

3.1.5实验数据处理

3.2结果与分析

3.2.1 DNA提取效果的检测

3.2.2 DNA浓度检测结果

3.2.3引物筛选结果

3.2.4两个系雌核发育鲢近交F1和对照组RAPD扩增结果

3.2.5 Shannon指数和多态位点百分率

3.2.6 Nei氏遗传相似度和遗传距离

3.2.7聚类图

3.3讨论

参考文献

第二章图版(2-1～2-52)

致 谢