猪骨骼肌卫星细胞的分离培养及TRIM55基因的染色体定位、SNP检测和表达谱分析

摘要

骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells)是骨骼肌中位于肌细胞膜和基膜之间的具有增殖分化潜力的肌源性干细胞。一般状态下骨骼肌卫星细胞是静息的,当其被激活后,便具有增殖分化、融合成肌管、再形成肌细胞的能力。由于骨骼肌卫星细胞在骨骼肌早期生长发育以及再生中扮演着非常重要的地位,因此骨骼肌卫星细胞已成为当前的研究热点之一.
　　 提高商品猪的胴体瘦肉产量及胴体品质是养猪生产中的重要目标之一.而瘦肉率及胴体品质的提高有赖于骨骼肌的生长状况。为了研究肌细胞的生长发育规律、了解肌细胞形态结构的变化以及开展与骨骼肌生长发育相关新基因的功能研究,都需通过猪骨骼肌卫星细胞来进行研究。因为在体内环境条件下,很难对其开展深入研究。体外原代培养则提供了一种新手段
　　 本试验采用胶原酶消化法,从初生仔猪背最长肌中分离骨骼肌卫星细胞,而后利用差速贴壁法对其进行纯化,初步建立了猪骨骼肌卫星细胞的体外原代培养方法.本研究结果表明,该方法简便、快捷且有效,所分离的骨骼肌卫星细胞具有分裂、分化的潜能,可用于进一步对猪骨骼肌细胞分化、增殖与生长的体外研究.
　　 猪骨骼肌卫星细胞的体外原代培养技术的建立,为本实验室提供一个猪骨骼肌卫星细胞试验操作平台；同时为开展与猪骨骼肌生长发育相关基因的功能研究奠定了基础。

目录

文摘

英文文摘

基金项目资助

第一章 猪骨骼肌卫星细胞的分离培养

1 文献综述

1.1 骨骼肌的发生、发育过程及其分子调控机制

1.2 骨骼肌卫星细胞研究进展

2 研究目的和意义

3 材料与方法

3.1 试验材料

3.2 主要仪器、设备及器皿

3.3 试验方法

4 结果

4.1 骨骼肌卫星细胞的分离

4.2 骨骼肌卫星细胞的纯化

4.3 骨骼肌卫星细胞的原代培养

5 讨论

5.1 关于猪骨骼肌卫星细胞的分离与纯化

5.2 关于猪骨骼肌卫星细胞的原代培养

5.3 应用猪骨骼肌卫星细胞进行基因功能研究的可行性分析

6 本研究获得的结果及对未来工作的建议

参考文献

第二章 猪TRIM55基因的染色体定位、时空表达谱分析和SNP检测

1 文献综述

1.1 猪生产性状相关基因与QTL研究现状

1.2 TRIM55基因的研究进展

1.3 猪新基因分离的研究方法

2 研究目的和意义

3 材料.与方法

3.1 试验材料

3.2 方法

4 结果

4.1 猪TRIM55基因片段的分离、序列分析与鉴定结果

4.2 猪TRIM55基因的染色体精细定位结果

4.3 猪TRIM55基因的时空表达谱结果

4.4 猪TRIM55基因的SNP检测

5 讨论

5.1 关于根据EST的基因分离及引物设计

5.2 关于TRIM55基因的物理定位结果

5.3 关于TRIM55基因的时空表达谱分析

5.4 关于等位基因频率在猪群间的分布差异问题

5.5 关于TRIMS5基因与部分生产性状的初步关联分析

6 小结

6.1 本研究获得的结果

B.2 本研究的创新点与特色

6.3 本研究不足之处及下一步值得研究的工作

参考文献

附录1 缩略词表

附录2 主要性状的中英文对照和缩写

在读期间发表的论文题录

致谢