皱皮木瓜中齐墩果酸和熊果酸测定、提取及抗肿瘤活性研究

摘要

木瓜为我国传统中药,药食同源,含有丰富营养物质,具有很高的研究价值。本文采用现代仪器手段对木瓜中生物活性成分齐墩果酸和熊果酸提取分离、结构鉴定等进行了一系列研究工作,并探讨了木瓜提取物对H22荷瘤小鼠肿瘤抑制和增强免疫作用。为木瓜及其保健产品的研发提供科学依据。主要研究结果如下:
　　 1.皱皮木瓜中齐墩果酸和熊果酸分析方法的建立
　　 通过高效液相色谱法发现湖北资丘木瓜中含有熊果酸。建立了同时测定木瓜中齐墩果酸和熊果酸最佳色谱条件,即:色谱柱:ODS C18柱(5μm,250mm×4.6mm i.d.)；流动相:甲醇/水/冰醋酸=85/15/0.01(v/v/v)；流速:1.0mL/min；柱温:25℃;检测波长:210nm；灵敏度:0.01AUFS；进样量:10μL。结果表明,齐墩果酸和熊果酸色谱峰形较好,齐墩果酸和熊果酸色谱峰分离度达到1.4。同时测定了皱皮木瓜中齐墩果酸含量为0.59％,熊果酸含量为0.12％。
　　 2.皱皮木瓜中齐墩果酸和熊果酸提取工艺研究
　　 探讨了影响齐墩果酸和熊果酸提取的因素水平,由正交实验得出,木瓜中齐墩果酸最优提取条件为木瓜原料粒度为40目,在60℃下,用95％酒精回流提取3 h,料液比为1:8(w/v),提取2次；木瓜中熊果酸最优提取条件为木瓜原料粒度为60目,在60℃下,用95％酒精回流提取3 h,料液比为1:6(w/v),提取2次。
　　 3.皱皮木瓜中齐墩果酸分离纯化、结构鉴定研究
　　 本章用重结晶方法分离纯化木瓜中齐墩果酸,此法方便、简单,齐墩果酸经多次重结晶后,纯度达98.6％。用液质联用(HPLC-MS-MS)、高效液相色谱(HPLC)、红外光谱(IR)、紫外可见光谱(UV-VIS)、熔点(MP)等手段对分离得到的结晶进行分析,结果表明该结晶纯度高,理化性质与文献一致。
　　 4.皱皮木瓜提取物体内抗肿瘤与增强免疫活性研究
　　 采用昆明种小鼠,随机分为6组进行实验。结果显示,高剂量组提取物对小鼠H22肿瘤抑瘤率可达26.47％,肿瘤组织病理学观察表明所设剂量组对小鼠体内H22荷瘤均有一定的抑制作用。提取物能增强荷瘤小鼠迟发型超敏反应、提高血清溶血素含量、增强腹腔巨噬细胞的吞噬能力、提高小鼠NK细胞活性,表明木瓜中齐墩果酸和熊果酸能提高荷瘤小鼠免疫力,对肿瘤有预防作用。同时还能显著提高荷瘤小鼠血清中SOD含量(P<0.01),降低MDA含量(P<0.01),表明木瓜中齐墩果酸和熊果酸可提高荷瘤小鼠机体抗氧化能力,有良好的抗脂质过氧化作用。

目录

文摘

英文文摘

第一章 文献综述

1 皱皮木瓜研究进展

1.1 皱皮木瓜的化学成分

1.2 皱皮木瓜的药理活性

2 齐墩果酸和熊果酸研究进展

2.1 理化性质

2.2 提取分离

2.3 含量测定

2.4 齐墩果酸生物活性及改性研究

2.5 熊果酸生物活性及改性研究

2.6 齐墩果酸和熊果酸的应用

3 课题研究

3.1 研究意义

3.2 研究内容

第二章 皱皮木瓜中齐墩果酸和熊果酸测定方法的建立

前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果与分析

2.1 测定条件的影响与优化

2.2 方法学评价

2.3 样品的测定

3 结论

第三章 皱皮木瓜中齐墩果酸和熊果酸提取工艺的研究

前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果与分析

2.1 单因素实验

2.2 正交实验

2.3 提取次数的影响

3 结论

第四章 皱皮木瓜中齐墩果酸分离纯化与结构的初步鉴定

前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果与分析

2.1 纯化过程高效液相色谱图

2.2 结晶工艺

2.3 齐墩果酸基本理化性质

3 结论

第五章 皱皮木瓜提取物体内抗肿瘤与增强免疫活性初步研究

前言

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.2 实验方法

2 结果与分析

2.1 木瓜提取物体内抑瘤作用

2.2 肿瘤组织病理学观察

2.3 迟发型超敏反应(DTH)

2.4 血清溶血素含量测定

2.5 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验

2.6 NK细胞活性的测定

2.7 血清中SOD活性的测定

2.8 血清中MDA含量的测定

3 结论

第六章 结论

参考文献

致谢