甘蓝型油菜应答核盘菌侵染早期表达模式分析

摘要

油菜菌核病是我国油菜上的重要病害，目前还没有全免疫的抗病品种。在分子水平上了解油菜（Brassica napus）与核盘菌（Sclerotinia sclerotiorum）在侵染早期的互作过程，对抗病育种有重要意义。本研究利用抑制差减杂交（SSH）技术，结合反向northern筛选，对接种后0.5-8.5小时油菜差异表达片段进行了初步分析。研究的主要内容如下： 1．取菌丝块接种后0.5-28.5小时（隔4小时取材一次）的叶片作为阳性材料，同时取等量未接种的叶片作为阴性材料，阳性材料与阴性材料各自等量混合，提取mRNA，采用抑制差减杂交技术构建了正反向富集菌核病早期抗性相关基因片段的差减cDNA文库。正向文库含含1920个克隆，反向文库含1008个克隆。插入片段大小约在300bp-900bp，大部集中在500-600bp。粗略估计富集1000倍。 2．接种核盘菌0.5、4.5、8.5小时叶片和相同时间段的未接种叶片的总RNA做探针，与cDNA点阵膜杂交，筛选接种与未接种材料在相同时间段基因表达差异，推定为抗病相关基因。得到50个非重复EST序列。从其功能看，50个ESTs序列分属于初级代谢、能量代谢、次生代谢、抗病防御、细胞结构、转录因子、蛋白质合成、信号转导等生命过程，关系到抗病反应过程包括参与氧爆发过程、茉莉酸途径，细胞保护和抗病防御有关代谢反应途径等。18个基因片段在GenBank尚不能推断其功能。通过对上述基因功能的分析，推断甘蓝型油菜抗核盘菌早期可能主要依赖氧爆发和茉莉酸途径；结合相关基因在不同时间段的表达变化，对它们对应的蛋白在相应反应途径上的相互作用作了初步的分析和推断。 3．对cDNA点阵膜杂交差示筛选的3个代表不同种类的克隆进行了不同时间段的Northern杂交验证及表达变化分析，结果不仅验证了cDNA点阵杂交的正确性，还通过分析这些基因在不同时间段的表达变化，展示不同类型基因表达模式存在差异。

目录

文摘

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论文说明：缩略词表

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第一章文献综述

第二章材料与方法

第三章结果与分析

第四章讨论

参考文献

致谢