天蓝色链霉菌A3（2）稀有密码子UUA翻译忠实度相关基因的研究

摘要

天蓝色链霉菌A3（2）基因组测序菌株是M145。M145不同于其它衍生菌株，其染色体上的bldA基因不能够被中断，是营养生长的必需基因，相应基因型为bad<’->（bldA-dependent）。bldA编码天蓝色链霉菌基因组中唯一有效识别稀有UUA亮氨酸密码子的tRNA（Leu）UUA，在翻译水平上控制着含有TTA密码的基因的时空表达，在链霉菌的形态分化和生理分化调控系统中发挥着重要作用。本论文的目的是研究使M145中bldA变为必需基因的内在机制。 M145依赖bldA生长，表明M145中存在含有TTA密码的必需基因，本文首先尝试从其基因组中145个含TTA密码的ORF中找寻。选择SCD95A.45c构建其基因置换载体pilL352，利用该基因置换载体成功的中断了M145的SCD95A.45c基因，得到基因缺失突变株TW1。经验证，证明SCD95A.45c不是含TTA密码的必需基因，同时该基因也非bldA调控形态分化或次级代谢的靶基因。 根据阿维链霉菌的基因组信息，用Barn HI酶解染色体DNA构建基因组亚文库，筛选得到含有bldA同源基因tRNA57（本文命名为bldAa）的克隆pHL351，以此为基础构建基因置换载体pHL358。利用pHL358得到了bldA<,a>。基因缺失突变株TW10，最终鉴定阿维链霉菌NRRL8165的bad基因型为bad<'+>。同时，实验证明在NRRL8165中bldA。调控菌株产孢分化和阿维菌素的合成。 为了阐明M145中bldA变为必需基因的机制，尝试用鸟枪克隆的方法从bad<'+>菌株M600中随机克隆野生型的bad基因。鸟枪法共筛选了21,819个克隆，得到7个符合筛选标准的克隆子。PCR验证证明其染色体上的bldA已被中断。但对这部分克隆进行重转化验证时发现它们不能重复使M145::SCE25AT中的bldA被中断。说明原先的表型变化不是由外源克隆的转入造成的，可能是菌株的自身突变造成的。

目录

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摘要

缩略语

1文献综述

2材料与方法

3结果与分析

4总结与展望

参考文献

致谢