具QS干扰活性微生物的筛选及铜绿假单胞菌临床分离株的生物检测

摘要

近来研究发现，一些动植物病原菌利用群体感应系统（Quorum sensing,QS）调节毒性因子的表达。QS干扰物（Quorum sensing inhibitor,QSI）通过阻断病原菌的QS系统而起抗病作用，但不杀死细菌，因此不大可能诱导细菌产生抗性。目前QS干扰物的筛选已成为世界范围内的研究热点之一。 本研究根据非酶类QSI的特点，建立了微生物初筛模型，即以胡萝卜软腐欧文氏菌（Erwinia carotovora）SCGl为报告菌，以马铃薯为测试植物，筛选具有抗病活性的微生物。通过该模型筛选到312株对E.carotovora SCGl的致病力具有明显抑制作用的菌株。抑菌圈检测得到对SCGl生长没有抑制作用的3株细菌B6-5、B38、B35。菌株B6-5的抗病效果最好，作QS干扰的进一步验证和检测分析。 在混有适量报告菌根癌土壤杆菌（Agrobacteriun tumefaciens）WCF47、AHL信号产生菌E.carotovora SCGl或E.coli DH5α（pJZ365）、X-gal的ABM检测培养基上打孔，点样孔中加入B6-5灭酶培养上清液，培养12h后，发现点样孔周围出现了和蓝色背景反差明显的白色圈（非透明圈），而液体LB对照周围无白色圈，说明：B6-5灭酶培养上清液中的确存在干扰E.carotovora SCGl和E.coliDH5α（pJZ365）QS系统的活性物。 将A.tumefaciens WCF47接入混有B6-5灭酶培养上清液和AHL粗提物的培养基中，经4h培养，测β-半乳糖苷酶酶活。结果发现，添加了菌株B6-5灭酶培养上清液的样品组的β-半乳糖苷酶活性和清水对照组相比没有明显变化（反而稍高），说明B6-5灭酶培养上清液对AHL信号合成后的作用过程无影响。 E.coli DH5α（pJZ365）接入添加了B6-5灭酶培养上清液的培养基中进行培养，定时取样制备上清液。以WCF47为指示菌，用混有X-gal的琼脂条检测AHL信号的产生量。结果显示，待测样下端的蓝斑明显少于对照，且色浅，证明了B6-5灭酶培养上清液通过抑制AHL信号的合成而干扰QS系统。 临床分离的铜绿假单胞菌常在生化反应方面发生较大变异，传统的生化鉴定法难以及时进行确诊。产生特定的AHL信号分子是铜绿假单胞菌的特征之一，本文对多株铜绿假单胞菌临床分离株及其生化反应变异株AHL信号产生特性进行了系统研究。在此基础上建立了一种利用AHL信号生物感应菌株WCF47快速准确检测铜绿假单胞菌临床分离株及其生化反应变异株的新方法。

目录

文摘

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第一章具QS干扰活性微生物的筛选及其干扰机制初探

第二章铜绿假单胞菌临床分离株及其生化反应变异株的生物检测

参考文献

致谢