碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜上皮细胞增殖影响的研究

摘要

本文制作了角膜上皮细胞，采用DMEM/F-12培养液培养，将培养到第三代的角膜上皮细胞用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法观察碱性成纤维细胞生长因子在不同浓度(0ng/mL，1ng/mL，10ng/mL，100ng/mL)和不同时间点(24h，48h，96h)对犬角膜上皮细胞培养增殖性能来研究碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜上皮细胞的生长和增殖的影响，检测所的的结果表示为光密度值(OD)值，OD值的大小与细胞密度呈正比。结果表明，从1ng/mL开始，随浓度递增，OD值逐渐上升，10ng/mL时达到峰值，此后随浓度递增OD值下降。bFGF组从lng/mL开始各浓度组OD值均大于对照组(P<0.05)，说明bFGF对犬角膜上皮细胞有明显的促分裂作用。10ng/mL组在24h、48h、96h均高于其他剂量组。说明碱性成纤维细胞生长因子有明显促进犬角膜上皮细胞增殖的作用，在一定范围内呈剂量依赖性，10ng/mL为促进犬角膜上皮生长的最佳剂量。 此外，建立了犬角膜环钻损伤模型，分析碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜损伤的治疗效果。将24只杂交犬随机分成四组：生理盐水对照组、0.1μg/mL bFGF组、0.5μg/mLbFGF组、1μg/mLbFGF组。每组使用不同浓度的bFGF点眼，每日三次，每次两滴。并在术后第1d、第3d、第5d、第7d同一时间用荧光染色素钠染液点眼，照相观察角膜上皮愈合效果。并于术后第3d、第7d、第14d取角膜各5只制作病理切片观察角膜上皮愈合情况及胶原纤维排列情况、成纤维细胞生长情况。荧光染色结果表明，环钻损伤后第1 d，0.5μg/mL剂量组愈合率为27.47％，1μg/mL剂量组愈合率为312.3％，与对照组相比差异极显著(P<0.01)。环钻损伤后第3d、第5d不同浓度的bFGF各组愈合率均极显著高于对照组(P<0.01)，第7d时除对照组有两例愈合不良外各组均基本愈合。显示碱性成纤维细胞生长因子能促进犬角膜损伤后角膜上皮愈合，早期应用即能发挥作用。病理切片观察发现添加碱性成纤维细胞生长因子的犬角膜上皮修复快于对照组，表现为细胞层数比对照组多，细胞排列整齐，焱性细胞浸润少，另外碱性成纤维细胞生长因子还能促进犬角膜损伤后角膜基质有序修复。未发现碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜损伤后角膜新生血管生长有明显促进或抑制作用。

目录

论文说明：缩略语表

声明

1前言

1.1文献综述

1.1.1碱性成纤维细胞生长因子的发现

1.1.2 bFGF的基础研究现状

1.1.3 bFGF 临床应用研究

1.1.4存在的问题

1.2研究内容和目标

1.3研究的目的意义

2碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜上皮细胞增殖的影响

2.1材料与方法

2.1.1主要仪器设备

2.1.2主要药品及试剂

2.1.3犬角膜上皮细胞培养及传代

2.1.4角膜上皮细胞增殖观察

2.2结果

2.2.1原代角膜上皮细胞培养及传代

2.2.2不同浓度碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜上皮细胞增殖影响

3碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜损伤修复影响

3.1材料与方法

3.1.1主要仪器设备

3.1.2主要药品与试剂

3.1.3试验动物与分组

3.1.4角膜损伤模型的制备

3.1.5 bFGF的使用

3.1.6角膜上皮愈合率和新生血管情况观察

3.1.7角膜病理切片观察

3.2结果

3.2.1荧光染色法统计角膜上皮愈合率

3.2.2组织病理学观察

4讨论

4.1犬角膜上皮细胞培养方法

4.2角膜损伤模型的建立

4.3角膜病理切片制作

4.4碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜上皮增殖的影响效果

4.5碱性成纤维细胞生长因子对犬角膜环钻损伤的修复作用

5结论

参考文献：

致谢

附录