阿维菌素在水产品中残留检测及在草鱼体内药动学研究

摘要

阿维菌素类药物（AVMs）属大环内酯类抗生素，由于其优异的驱虫活性和较高的安全性，被视为目前最为优良、应用最广泛的兽用驱虫药。本文采用高效液相色谱法测定了水产品中阿维菌素的残留量，并进行了阿维菌素在草鱼体内的药代动力学和组织中的残留消除规律研究。
　　 本论文首先建立了水产品中阿维菌素残留量的固相萃取-高效液相色谱荧光分析法。样品用乙腈提取，无水硫酸钠脱水，碱性氧化铝SPE柱净化，N-甲基咪唑（NMIM）和三氟乙酸酐（TFAA）的乙腈溶液衍生化，衍生物用高效液相色谱分析，激发波长为365 nm，发射波长475 nm。该方法下阿维菌素在1.0～100.0μg/L范围内呈线性关系，相关系数为r=0.9999，加标回收率在80.28％～98.46％之间，变异系数为2.86％～9.68％，检测限为0.1μg/kg。
　　 其次，采用药浴的方式研究了阿维菌素在草鱼肌肉、肝脏、肾脏、血浆和鳃组织中的富集和消除规律。在水温26±1℃条件下，对草鱼单次浸泡给药0.3μg/L，在给药后不同时间点随机采样，取血、肝脏、肌肉、肾脏和鳃等组织，样品处理后作HPLC-FLD法检测，结果表明：阿维菌素高、中、低（5.0μg/kg、20.0μg/kg、100.0μg/kg）3种浓度在各组织中的回收率在78.59％～94.75％，日内变异系数在2.24％～7.81％之间，日间变异系数在3.57％～8.37％之间。药后72h时草鱼肌肉、肝脏、肾脏和鳃中阿维菌素浓度均达到最高值，其中肝脏中的浓度最高，达到17.8μg/kg，其后依次为肾脏（12.1μg/kg）、肌肉（10.7μg/kg）和鳃组织（5.2μg/kg）；血浆中AVM浓度在48h达到最高（11.2μg/L）；药后528h草鱼各组织中阿维菌素已基本检测不到。水体中阿维菌素含量随着鱼体代谢、光照等因素影响逐渐的消除，药后14 d已基本检测不到。
　　 最后，在26±1℃水温条件下，按0.1mg/kg鱼体重的剂量口灌阿维菌素，研究了阿维菌素在草鱼体内的药代动力学特征及残留消除规律。采用高效液相色谱荧光法测定阿维菌素在草鱼血浆、肝脏和肌肉中的浓度，数据经3P97药动学程序分析。结果表明：草鱼单剂量口灌AVM0.1mg/kg，血药经时过程符合二室开放模型。主要药代动力学参数为：吸收速率常数ka0.056；消除半衰期T1/2β218.71h；药时曲线下面积AUC1638.03μg·h/L；表观容积分布Vd/F0.0026μg/L；达峰时间Tmax24.00h；达峰浓度Cmax18.51μg/L。本实验中，给药后14天，可食用组织肌肉和肝脏中的药物浓度均低于同类药物的最高残留限量，建议草鱼单剂量（0.1mg/kg）口灌阿维菌素的休药期为14天。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语表(Abbreviation)

声明

第一章文献综述

1阿维菌素的结构和理化性质

2阿维菌素的作用机理

3阿维菌素最高残留限量及毒理学的研究

3.1阿维菌素的最高残留限量

3.2阿维菌素类药物的毒理作用

4阿维菌素检测方法概况

4.1高效液相色谱-紫外检测方法(HPLC-UV)

4.2液相色谱-荧光检测方法(HPLC-FLD)

4.3液相色谱-质谱检测方法(LC/MSMS)

4.4酶联免疫法(ELISA)

4.5薄层色谱法(TLC)

5阿维菌素类药物动力学和消除规律研究

5.1阿维菌素类药物在畜禽体内的药代动力学和残留消除规律研究

5.2阿维菌素类药物在水产动物体内的药代动力学研究概况

6研究目的及意义

第二章高效液相色谱法测定水产品中阿维菌素的残留量

1材料与方法

1.1仪器设备

1.2药品与试剂

1.3实验动物

1.4色谱条件

1.5标准曲线的测定

1.6样品处理

2结果与分析

2.1阿维菌素标准溶液色谱图

2.2方法的线性关系及检测限

2.3方法的回收率和精密度

2.4样品测定

3讨论

3.1配置标准溶液溶剂的选择

3.2实验鱼肌肉的选择

3.3提取条件的选择

3.4固相萃取柱的选择

3.5衍生化条件的选择

3.6检出限、回收率和变异系数

4小结

第三章阿维菌素药浴在草鱼体内的残留消除规律研究

1实验材料与方法

1.1实验动物

1.2药品与试剂

1.3给药与取样

1.4仪器设备

1.5样品测定

1.6 HPLC分析方法

1.7数据处理

2结果

2.1给药方法

2.2标准曲线与最低检测限

2.3回收率与精密度

2.4色谱图

2.5阿维菌素药浴在草鱼各组织中的分布及消除情况

3讨论

3.1组织样品处理方法

3.2阿维菌素在草鱼各组织中的消除规律及残留分析

4小结

第四章阿维菌素口灌在草鱼体内的药动学及残留研究

1材料与方法

1.1实验动物

1.2药品与试剂

1.3仪器设备

1.4给药方法及取样

1.5样品处理及HPLC测定

1.6数据处理

1.7休药期

2结果

2.1标准曲线与最低检出限

2.2回收率与精密度

2.3单剂量口灌阿维菌素在草鱼体内的药代动力学

2.4样品色谱图

3讨论

3.1实验动物的选择

3.2 AVM在草鱼体内的药动学特征

3.3组织样品中的残留分析及其特征

3.4临床休药期(WDT)的确定

4小结

参考文献

致谢

读研期间发表论文