对桔小实蝇具生物活性的苏云金芽孢杆菌的筛选及菌株YJ-82特性研究

摘要

本文通过对实验室保存的39株苏云金芽孢杆菌分离株的生物活性测定，筛选出对桔小实蝇高毒力的菌株YJ-82并对该菌株进行分子特性的研究，结果如下：
　　 1.苏云金芽孢杆菌分离株对桔小实蝇毒力测定
　　 在39株苏云金芽孢杆菌分离株对桔小实蝇幼虫的室内生物测定中，发现有7株菌株（HZ-7、HZ-104、XM-98、YJ-82、HZ-74、XF-71、HZ-94）具有较高的生物活性，药后5天对桔小实蝇的校正死亡率达到70.00％以上，其中YJ-82菌株的校正死亡率达88.00％，高于其它分离株。
　　 2.YJ-82菌株分子特性研究
　　 进一步考察了7株分离株对双翅目害虫桔小实蝇幼虫的生物活性，明确了苏云金芽孢杆菌不同菌株的生物活性之间存在很大差异，并对筛选的YJ-82菌株进行了一系列的基因及杀虫蛋白特性的研究。以cry1Aa，cry1Ab，cry1Ac，cry1Ae，cry1B，cry1C cry1D，cry1E，cry1E cry1G，cry2，cry4A，cry4B，cry4C，cry4D等16对特异性引物进行PCR分析。结果表明YJ-82菌株不但含有丰富的cry1类基因，同时还含有cry2和cry4类基因。菌株PCR产物测序结果的同源性分析表明YJ－82菌株的cry2基因与cry2Ab（GenBank：M23724）的同源性为99％，可以推测出YJ－82含有cry2Ab基因，这与PCR-PFLP分析结果是一致的。cry4类基因与cry40-like和ORF2基因（Genbank：AB112346）同源性达89％；而与cry4A的同源性较低，在77％左右。初步可以推测该菌株含有cry40-like和ORF2基因，而非cry4类基因。SDS-PAGE分析表明YJ－82菌株编码130 kDa、65kDa、27kDa，三条蛋白带，与基因型测定结果是一致的。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词表

声明

第一章文献综述

1苏云金芽孢杆菌的生物学特性

2苏云金芽孢杆菌研究概况

3苏云金芽孢杆菌毒素

4杀虫晶体蛋白及其基因型

4.1杀虫晶体蛋白分类

4.2杀虫晶体蛋白基因型的鉴定

5 cry基因与伴孢晶体形态及杀虫活性的关系

6苏云金芽孢杆菌的杀虫机制

7桔小实蝇概述

8本研究的目的及意义

第二章Bt菌株对桔小实蝇幼虫毒力测定

1材料与方法

1.1供试菌株

1.2供试昆虫

1.3试剂

1.4桔小实蝇幼虫的人工饲养

1.5 Bt对桔小实蝇杀虫活性初筛

1.6杀虫活性复筛

1.7 YJ-82菌株伴孢晶体检测

2结果与分析

2.1桔小实蝇人工饲养

2.2对照与经处理的桔小实蝇

2.3 YJ-82菌株伴孢晶体检测

2.4 Bt菌株对桔小实蝇幼虫的生测结果

3 讨论

第三章 YJ-82菌株分子生物学特性研究

1实验用品

1.1材料与培养基

1.2试剂

1.3仪器设备

2方法

2.1质粒DNA的提取

2.2 PCR反应体系及反应条件

2.3 YJ-82菌株基因型鉴定和SDS-PAGE

2.4 cry2类基因活性区域扩增与PCR-RFLP分析

2.5 cry2活性区域纯化回收、序列测定与分析

2.6 cry4类基因活性区域PCR产物的克隆与序列分析

3结果与分析

3.1菌株质粒DNA图谱分析

3.2 YJ-82菌株基因型鉴定和SDS-PAGE

3.3 cry2类基因活性区域扩增与PCR-RFLP分析

3.4 cry2类基因的纯化回收与序列分析

3.5 cry4类基因活性区域的克隆与序列分析

3.6 Cryx的系统进化树分析

4 讨论与结论

4.1毒力测定

4.2菌株YJ-82的质粒与基因型鉴定

4.3 YJ-82菌株的SDS-PAGE

附录

参考文献

致谢