饲用酵母菌的分离与鉴定及复合微生态制剂的研制

摘要

如今在畜牧业的生产过程中,动物促生长及疾病的防治很大程度上还是依赖于抗生素,可是抗生素带来的负面影响也是日益突出,因此寻求新的、安全的制剂来取代抗生素已经成为一种现实的需要。微生态制剂是通过改善宿主肠道菌群平衡而发挥益生作用的生物制剂,是实现安全、无污染、无药物残留的绿色畜产品的重要途径。
　　 本次试验一共分离出8株酵母菌,并利用26S rDNA基因DI/D2区序列分析法对其酵母菌进行了鉴定,得到了6株饲用酵母和2株毛孢子菌。对其中的一株酿酒酵母进行了生物学特性的研究。分别研究了酵母菌和枯草芽孢杆菌的发酵工艺,以及这两株菌与乳酸菌的混合发酵工艺。优化了冷冻干燥、喷雾干燥和烘干干燥三种工艺,并探讨了三种工艺的优劣。具体结果如下:
　　 (1)酿酒酵母50L发酵罐发酵条件为:接种量为5％(1.5L),发酵温度设为30℃,通气量为1.3 Nm3/h,搅拌速度为180rpm,添加3％泡敌,1％的豆油做消泡剂。在此条件下,发酵28小时,酿酒酵母活菌数为1.42×1011 cfu/ml。
　　 (2)采用单因素试验和正交试验的方法确立了枯草芽孢杆菌的最佳发酵培养基配方为:蔗糖2％、豆粕2％、NaCl0.1％、MgSO40.02％、MnSO40.005％、KH2PO4\K2HPO40.3％:0.1％、0.02％CaCl2;发酵罐培养条件为:装液量为60％、3L、接种量为1％、初始pH为7.0、温度30℃、转速180rpm、通气比在1:0.3—0.5。在此条件下进行的5L发酵罐发酵,活菌数可以达到5.3×1012cfu·mL-1。
　　 (3)根据各菌种间的协同关系,初步确定了不同菌种混合发酵的工艺,发酵条件为:接种量为5％,发酵温度为35℃,转速为180rpm,接种次序为先接种酿酒酵母和乳酸菌,再接枯草芽孢杆菌。
　　 (4)酵母菌的冷冻干燥保护剂以脱脂奶粉10％+麦芽糊精5％为最佳,活菌数达到9.31×1010 cfu/ml,存活率为65.6％；乳酸菌和枯草芽孢杆菌以脱脂奶粉10％+蔗糖10％为最佳活菌数分别为1.44×1011 cfu/ml和1.52×1011 cfu/ml,存活率分别为68.6％和82.6％。
　　 (5)喷雾干燥的进风温度为160℃,出口温度为77℃,以5％脱脂奶粉作为保护剂,制出的菌粉细腻,不发粘效果较好。各菌剂干燥结果为:酿酒酵母活菌数6.25×1010 cfu/ml,存活率为44.0％；乳酸菌活菌数1.16×1011 cfu/ml,存活率为55.2％；枯草芽孢杆菌活菌数为1.15×1011 cfu/ml,存活率为62.5％。