变温热处理结合茎尖培养脱除沙梨离体植株潜隐病毒研究

摘要

苹果褪绿叶斑病毒(Apple chlorotic leaf spot virus，ACLSV)、苹果茎沟病毒(Apple stem grooving virus，ASGV)和苹果茎痘病毒(Apple stem pitting virus，ASPV)是世界仁果类果树上普遍发生的三种潜隐病毒，我国主栽的梨品种的平均带病毒率为86.3％。根据果树病毒病通过嫁接传染等特点，目前主要通过栽培无病毒苗木减轻病毒病的危害。本研究以同时带有这三种病毒的沙梨离体植株为材料，采用变温热处理结合茎尖培养方法进行病毒脱除试验。
　　 1．对采集的21个沙梨品种的枝条材料进行病毒检测，结果显示所有材料均带至少一种潜隐病毒，其中ACLSV的带毒率为90.48%，ASGV85.71%，ASPV42.86%。通过茎尖培养（诱导分化培养基为MS+0.2mg/L IBA+1.0mg/L6-BA，琼脂5.4g/L，蔗糖30g/L，pH5.8）方法处理21个沙梨品种251个茎尖，共获得20个沙梨品种366株离体植株。结果显示，不同沙梨品种的诱导分化成活率和茎尖分化系数有异，安农一号、清香、桂冠和丰水等5个品种的成活率最高，达到100%，而金水一号未成活。中梨一号的茎尖分化系数最高，新高其次，桂冠和翠冠最低。对15个品种离体植株79个芽系进行病毒检测的结果显示，ACLSV检出率为67.09%(53/79)，ASGV86.08%(68/79),ASPV32.91%(26/79)。
　　 2．采用变温热处理（34℃/40℃，8h/16 h交替）结合茎尖(大小约1mm)培养对8个沙梨品种的1014株带毒离体植株进行病毒脱除处理，共获得8个沙梨品种的69株脱毒材料。结果显示不同品种处理后的成活率和增殖系数有异，成活率中梨一号为14.7%，清香和金秋为9.0%，黄金为2.11%。增殖系数圆黄为2.7，新高为2，丰水、爱甘水和黄金等3个品种没有增殖。通过RT-PCR等方法对8个沙梨品种的65株脱毒材料进行病毒检测的结果显示，有5个沙梨品种的39株离体植株不带病毒，且不同病毒的脱除率有差异，ASGV为70.77%(46/65)，ACLSV90.77%(59/65)，ASPV95.38%(62/65)。