HIV-1两对重要蛋白质相互作用的研究

摘要

艾滋病(Acquired Immune Deficiency Syndrome，AIDS)已经成为严重威胁人类健康的公共卫生问题。HIV(Human Immunodeficiency Virus)是引起艾滋病的病原。研究HIV蛋白间的相互作用及其与宿主细胞蛋白间的相互作用对于理解HIV的感染机制、生命周期等意义重大。
　　 本实验室在前期利用酵母双杂交技术系统地研究了HIV-1蛋白-蛋白相互作用，发现了10对蛋白间存在相互作用，其中有4对蛋白相互作用在以往的文献中未见报道。在此基础上，本论文对其中两对新发现的蛋白相互作用(Vpu-gp120; gp41-Integrase)进行了更深入的研究。
　　 本研究首先利用免疫共沉淀的方法检测到HIV-1 Vpu蛋白和包膜糖蛋白gp120在生理条件下的相互作用，进一步证实了前期酵母双杂交的实验结果。随后对Vpu蛋白进行了一系列的截短和缺失，并利用酵母双杂交实验找到其与gp120蛋白相互作用的位点为Vpu蛋白72-81位氨基酸序列。同时，本研究也对包膜糖蛋白gp41进行了一系列的截短，通过酵母双杂交实验找到了其与整合酶Integrase相互作用的位点，即gp41蛋白的84-100位氨基酸序列。
　　 本研究发现了Vpu与gp120在生理条件下存在相互作用，并找到了Vpu与gp120及gp41与Integrase相互作用的位点，为探求这些相互作用的生物学意义提供了思路和方向，也为深入理解HIV-1的侵染机制等提供了重要的数据资料。

目录

声明

摘要

英文缩写表

第1章 前言

1 艾滋病与HIV-1

2 蛋白质相互作用的研究方法

2．1 酵母双杂交技术

2．2 双分子荧光互补技术(BiFC)

2．3 免疫共沉淀技术(Co-IP)

2．4 pull down技术

2．5 噬菌体展示技术(PDT)

2．6 荧光共振能量转移技术(FRET)

3 前期的工作基础

4 本课题涉及的四种蛋白质简介

4．1 包膜糖蛋白gp120与gp41

4．2 辅助蛋白Vpu

4．3 整合酶(integrase，IN)

5 本研究的目的意义及主要研究内容

第2章 分析确定Vpu与gp120在生理条件下的相互作用

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 Westem Blot检测Vpu蛋白和gp120蛋白的表达

2．2 免疫共沉淀(CO-IP)的结果与分析

3 讨论

第3章 利用酵母双杂技术研究Vpu与gp120相互作用的位点

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 pGBKT7-Vpu重组质粒的构建

2．2 自激活实验结果与分析

2．3 系列Vpu截短和缺失突变重组质粒的构建

2．4 Vpu与gp120相互作用位点确定的实验结果与分析

3 讨论

第4章 利用酵母双杂技术研究gp41与IN相互作用的位点

1 材料与方法

1．1 材料

1．2 方法

2 结果与分析

2．1 自激活实验结果与分析

2．2 质粒的构建

2．3 gp41与IN相互作用位点确定的结果与分析

3 讨论

第5章 结论

参考文献

致谢