饲料中串珠镰刀菌素高效液相色谱检测法的建立

摘要

串珠镰刀菌素(Moniliformin，MON)是一种广泛存在于世界各国的玉米，大米，小麦等粮食和饲料原料中的水溶性的毒素。串珠镰刀菌素对动物的心脏、免疫系统等多种组织器官均有损害，造成畜禽食欲不振、生长缓慢，甚至引起死亡，严重危害畜牧业生产。因此，饲料中串珠镰刀菌素的限量标准问题已经提上日程。为配合该限量标准的实施，需要建立相应的检测方法。
　　 本研究旨在建立一种标准化的检测饲料原料和饲料产品中串珠镰刀菌素含量的高效液相色谱法，并用此方法测定我国部分饲料原料及产品中的串珠镰刀菌素含量。主要研究结果如下:
　　 样品的提取程序:饲料样品粉碎后过40目筛并混匀，样品中的串珠镰刀菌素用四丁基硫酸氢铵溶液提取并配对，配对后的串珠镰刀菌素即可用二氯甲烷萃取，萃取液在氮气保护下35℃浓缩近干。残渣用流动相重定溶，定溶液经强阴离子交换固相萃取柱净化后以0.05mol/L磷酸二氢钠溶液洗脱并过滤，过滤液即可上机检测。
　　 高效液相色谱条件及参数:C18反相色谱柱（4.6×150mm，粒径5μm），流动相为含有离子对改性剂的乙腈-水(8+92)，流速1.0mL/min，检测波长227nm，柱温35℃，进样量20μL。串珠镰刀菌素的保留时间在11-13min之间，毒素浓度在0.01-4.0μg/mL时与峰面积的线性方程为y=306948x+7376.3，R2=0.9998。本方法对于串珠镰刀菌素纯品的检出限为0.0025μg/mL，对于玉米样品中的串珠镰刀菌素的检测定量限为0.025mg/kg。精密度试验表明平行性变异系数在7.33％-9.40％之间，重现性变异系数在7.89％-12.8％之间，再现性变异系数在4.01％-9.01％之间。总体回收率在0.025-4mg/kg水平时为75.3％-93.4％，变异系数为1.13％-12.9％。
　　 饲料样品中串珠镰刀菌素的检测结果:共搜集了205个饲料样品，测得串珠镰刀菌素阳性率为47.3％，平均含量为0.113mg/kg。其中猪配合饲料的阳性率最高，达75.9％，其次是DDGS和禽配合料，分别为58.3％和56.5％。阳性样品含量在0.003-0.786 mg/kg之间，平均含量最高的是鱼配合饲料(可达0.242 mg/kg)，其次是玉米和DDGS，分别为0.153 mg/kg和0.131 mg/kg。
　　 本研究建立了一套较为完整且标准化的用于测定饲料原料和饲料产品中串珠镰刀菌素的高效液相色谱法。

目录

声明

摘要

缩略语表

第一部分 文献综述

前言

1 串珠镰刀菌素的理化性质

1．1 基本性质

1．2 结构特点与毒性

2 串珠镰刀菌素的毒性作用及其机理

2．1 串珠镰刀菌素的毒性作用的分子机理

2．2 串珠镰刀菌素的毒性作

3 串珠镰刀菌素在世界范围内的检出情况

4 串珠镰刀菌素的检测方法

4．1 薄层色谱(TLC)法

4．2 高效液相色谱(HPLC)法

4．3 液质联用(LC-MS)法

5 选题依据及意义

6 研究的主要内容

6．1 建立检测串珠镰刀菌素的高效液相色谱法

6．2 我国部分饲料原料和饲料产品中串珠镰刀菌素污染情况调查

第二部分 试验材料和方法

1 试验材料

1．1 试验主要仪器设备

1．2 试验主要试剂及耗材

1．3 主要溶液配制

2 检测方法的建立

2．1 色谱条件的选择

2．2 串珠镰刀菌素的出峰稳定性

2．3 标准曲线的制作

2．4 串珠镰刀菌素提取纯化流程的优化

2．5 检出限和定量限的确定

2．6 方法精密度的测定

2．7 饲料原料和产品中串珠镰刀菌素的回收率

3 部分饲料原料及饲料产品中串珠镰刀菌素的污染情况

3．1 试验原料

3．2 分析步骤

3．3 高效液相色谱检测条件

3．4 串珠镰刀菌素含量的计算与表述

第三部分 结果与分析

1 检测方法的建立

1．1 色谱条件的选择结果

1．2 串珠镰刀菌素的出峰稳定性结果

1．3 标准曲线

1．4 串珠镰刀菌素提取纯化流程的优化结果

1．5 检出限和定量限的测定结果

1．6 方法精密度的测定结果

1．7 饲料原料和产品中串珠镰刀菌素的回收率结果

2 部分饲料原料及饲料产品中串珠镰刀菌素的污染情况结果

第四部分 讨论

1 色谱条件的选择

1．1 检测波长的确定

1．2 流动相和标准工作液溶剂的选择

2 提取纯化程序的建立

2．1 提取液和提取方式的选择

2．2 提取液浓缩条件的选择

2．3 强阴离子交换固相萃取(SAX SPE)柱的使用

3 检出限和定量限

4 方法的精密度

5 方法的准确性

6 串珠镰刀菌素在我国饲料原料和饲料产品中的污染情况

第五部分 小结与展望

1 小结

2 展望

参考文献

致谢