亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血液生理生化指标和非特异性免疫性能的影响

摘要

为了探讨亚硝酸盐对草鱼（ctenopharyngodon idellus）的急性致毒效应及其机理，本文研究了亚硝酸盐对草鱼红细胞(RBC)形态与功能、血液生化特性、非特异性免疫与抗氧化性能的影响。实验采用体质量为65.8±5.5g的草鱼为研究对象，设置4个亚硝酸盐暴露组(0.5 mg/L、1.0 mg/L、4.0 mg/L、16.0 mg/L)和1个空白对照组，各实验组设置3个重复，分别在毒性暴露0h、12h、24h、48h、96h进行血液生理生化指标和非特异性免疫力的检测，研究结果如下:
　　 1亚硝酸盐急性胁迫对草鱼红细胞形态与功能的影响
　　 在亚硝酸盐急性暴露下，1.0 mg/L和4.0 mg/L组RBC出现皱缩和变形;16.0mg/L组中的RBC形态由正常的椭圆形和纺锤形变为圆形，细胞肿胀且有大量破裂;0.5 mg/L组红细胞形态无显著变化。暴露96 h时，各暴露组RBC数量和血细胞比容(HCT)均显著低于对照组。随着暴露浓度的升高和暴露时间的延长，血红蛋白(HB)和高铁血红蛋白(MET)含量分别表现出下降和上升的趋势。暴露96h时，4.0 mg/L和16.0 mg/L组HB含量显著低于对照组，1.0 mg/L、4.0mg/L和16.0 mg/L组MET含量均显著高于对照。
　　 研究结果表明:亚硝酸盐急性胁迫对草鱼RBC形态和功能产生了显著影响，亚硝酸盐暴露可导致RBC形态发生改变，RBC数量和HCT降低，HB被大量氧化为MET，从而导致鱼体呼吸功能受到影响。
　　 2亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血液生化指标的影响
　　 血糖(GLU)含量随着暴露时间的延长和暴露浓度的升高表现出上升趋势，暴露48 h时各暴露组血GLU含量均显著高于对照组;血清总胆固醇(CHOL)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)含量在暴露12h时随亚硝酸盐浓度均表现出先上升后下降的趋势。随着暴露时间的延长，各浓度组CHOL、TG、HDL-C和LDL-C均下降;暴露96h时，均显著低于对照组。血清总蛋白(TP)和白蛋白(ALB)表现出相同的变化趋势，在短暂上升后下降，暴露96 h时显著低于对照组。白球比(A/G)随暴露时间的延长和暴露浓度的升高依次下降，暴露48h时显著低于对照组。乳酸脱氢酶(LDH)和谷丙转氨酶(GPT)随亚硝酸盐浓度的升高和暴露时间的延长依次上升，48 h时均显著高于对照组。
　　 结果表明:亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血糖水平、蛋白质代谢、脂代谢和关键代谢酶活性均产生了显著影响;血糖水平的升高预示机体处于应激水平，蛋白质和脂质大量消耗以维持机体能量供应;LDH和GPT活性升高预示着鱼体组织损伤，蛋白质代谢与脂质代谢受到抑制也可能与机体组织损伤有关。
　　 3亚硝酸盐急性胁迫对草鱼非特异性免疫和抗氧化性能的影响
　　 白细胞(WBC)数量随着亚硝酸盐浓度的升高和暴露时间的延长表现出上升趋势，暴露96h时，除0.5 mg/L组外其它各组均显著高于对照组。血清补体C3和C4含量在短暂上升之后表现出逐渐下降的趋势，暴露96h时，各暴露组补体C3和C4含量均显著低于对照组。血清酸性磷酸酶(ACP)和碱性磷酸酶（AKP）在暴露96h时均显著低于对照组;超氧化物歧化酶(SOD)在暴露24h时出现下降，4.0 mg/L和16.0mg/L组SOD活性均显著低于对照组。在96h暴露时间内，各暴露组谷胱甘肽(GSH)含量和γ-谷氨酰半胱氨酸合成酶(γ-GCS)均表现出先上升后下降的趋势，暴露96 h时，GSH含量和γ-GCS活性均显著低于对照组。血清总抗氧化能力(T-AOC)随着暴露时间的延长和浓度的升高表现出下降趋势，暴露96h时，各暴露组T-AOC均显著低于对照组。
　　 研究结果表明:亚硝酸盐急性胁迫对草鱼非特异性免疫免疫和抗氧化性能产生了显著影响，血清补体C3和C4含量以及ACP和AKP活性显著降低预示着鱼体非特异性免疫性能减弱，SOD活性和GSH含量降低导致了总抗氧化能力的减弱，鱼体抗氧化性能受到抑制。

目录

声明

摘要

缩略语表

第一章 文献综述

1．1 水体中亚硝酸盐的产生和来源

1．2 淡水鱼类对亚硝酸盐的吸收机制

1．3 亚硝酸盐对鱼体的主要危害

1．3．1 对鱼类的急性毒性研究

1．3．2 对鱼类红细胞的影响

1．3．3 对鱼类离子调控的影响

1．3．4 对鱼类免疫性能的影响

1．3．5 对鱼类生理代谢的影响

1．3．6 对鱼类内分泌的影响

1．3．7 对鱼类组织结构的影响

1．4 鱼类对亚硝酸盐的解毒机制

1．5 研究目的与意义

第二章 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼红细胞形态与功能的影响

2．1 前言

2．2 材料与方法

2．2．1 实验鱼

2．2．2 实验设计

2．2．3 样品采集与处理

2．2．4 血细胞生理特性检测

2．2．5 数据分析

2．3 结果与分析

2．3．1 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼红细胞形态的影响

2．3．2 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼红细胞数量和比容的影响

2．3．3 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血红蛋白和高铁血红蛋白含量的影响

2．4 讨论

第三章 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血液生化指标的影响

3．1 前言

3．2 材料与方法

3．2．1 实验鱼

3．2．2 实验设计

3．2．3 样品采集与处理

3．2．4 生化指标测定

3．2．5 数据统计分析

3．3 结果与分析

3．3．1 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血糖含量的影响

3．3．2 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血液脂质代谢相关指标的影响

3．3．3 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血液蛋白代谢相关指标的影响

3．3．4 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼血液代谢酶活性的影响

3．4 讨论

第四章 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼非特异性免疫性能的影响

4．1 前言

4．2 材料与方法

4．2．1 实验鱼

4．2．2 实验设计

4．2．3 样品采集与处理

4．2．4 白细胞计数与生化指标测定

4．2．5 数据统计分析

4．3 结果与分析

4．3．1 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼白细胞数量的影响

4．3．2 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼非特异性免疫性能的影响

4．3．3 亚硝酸盐急性胁迫对草鱼抗氧化性能的影响

4．4 讨论

参考文献

硕士期间论文发表情况

致谢