寄生于鲤4种碘泡虫的分类学研究

摘要

2012-2013年在湖北省汉江平原和重庆澎溪河流域从鲤的鳃和鳍分别采集到4种碘泡虫。采用形态学和分子生物学方法对其进行分类学研究。主要结果如下:
　　1、根据形态学、分子生物学及组织学特征，重新描述了苍梧碘泡虫和葡萄碘泡虫。
　　(1)苍梧碘泡虫（Myxobolus tsangwuensis Chen，1954）寄生于鲤鳃小片的毛细血管内。成熟孢子壳面观椭圆形，缝面观柠檬状，孢子长11.2±0.7(10.2-12.5)μm，宽9.3±0.3(8.5-10.0)μm，厚6.2±0.4(5.5-7.0)μm。无囊间突或偶发现有较小的囊间突，壳瓣光滑。两个梨形极囊大小不等，大极囊长5.0±0.2(4.4-5.3)μm，宽3.1±0.1(2.9-3.5)μm，极丝5-7圈。小极囊长3.9±0.2(3.4-4.3)μm，宽2.5±0.2(2.0-2.8)μm，极丝3-4圈。观察到有带粘膜的孢子和少数带有尾突的孢子。利用引物18e/18r扩增获得1，890 bp的18S rDNA序列，在Genbank中BLAST显示:在目前可得的序列中，没有与苍梧碘泡虫的18S rDNA序列完全一致的序列。系统发育分析显示苍梧碘泡虫与M.basilamellaris、贝壳碘泡虫聚在一起。
　　(2)葡萄碘泡虫(Myxobolus acinosus Nie et Li，1973)寄生于鲤鳃小片的毛细血管内。成熟孢子壳面观为茄形，前端较尖，后端钝圆，有的孢子前端稍弯向一侧。缝面观为透镜形或梨形。孢子长11.2±0.4(10.4-12.0)μm，宽6.4±0.3(6.0-7.1)μm，厚5.8±0.3(5.0-6.3)μm。拥有两个大小差异很大的极囊，大极囊梨形，长4.7±0.2(4.1-5.2)μm，宽2.7±0.2(2.4-3.0)μm，极丝盘曲7-8圈。小极囊短棒状，长2.5±0.2(2.1-2.9)μm，宽1.0±0.1(0.8-1.3)μm，极丝不明显。获得的18S rDNA序列在Genbank中BLAST显示:在目前可得的序列中，没有与葡萄碘泡虫的18S rDNA序列完全一致的序列。系统发育分析显示葡萄碘泡虫与长孢碘泡虫聚在一起，两者又与茄形单极虫、T.qadrii、野鲤碘泡虫聚为一支。
　　2.采用形态学和分子生物学方法，发现并鉴定了两新种。
　　(1)似葡萄碘泡虫，新种（Myxobolus pseudoacinosusn.sp.）发现于鲤鳃。成熟孢子壳面观为茄形，前端逐渐向一侧弯曲，后端钝圆。缝面观长梨形，前端较尖且稍弯向一侧。孢子长14.1±0.5(12.9-15.6)μm，宽6.5±0.3(6.0-7.3)μm，厚5.2-5.8μm。壳瓣光滑。孢子有两个大小不等的极囊，大极囊梨形，长6.5±0.3(6.0-7.2)μm，宽3.7±0.2(3.2-4.2)μm，极丝6-8圈。小极囊短棒状，长3.2圭0.3(2.8-3.8)μm，宽1.2±0.1(0.9-1.4)μm，极丝不明显，但观察到有释放极丝的现象。在Genbank中没有与似葡萄碘泡虫的18S rDNA序列完全一致的序列。系统发育分析显示似葡萄碘泡虫与葡萄碘泡虫、长孢碘泡虫聚在一起。
　　(2)陈马碘泡虫，新种（Myxobolus chenmai n.sp.）发现于鲤鳍。成熟孢子壳面观为椭圆形或圆形，孢子长14.5±0.7(13.0-15.9)μm，宽12.2±0.2(11.6-12.8)μm。拥有两个大小不等的梨形极囊，大极囊长5.5±0.2(4.9-5.9)μm，宽3.7±0.1(3.5-4.0)μm，极丝6-7圈。小极囊长4.7±0.2(4.2-5.2)μm，宽3.1±0.2(2.9-3.4)μm，极丝4-5圈。在Genbank中没有与陈马碘泡虫的18S rDNA序列完全一致的序列。系统发育分析显示陈马碘泡虫与寄生于鲤鳃的Myxobolus basilamellaris、贝壳碘泡虫聚在一起。

目录

声明

摘要

1 前言

1．1 粘孢子虫分类学研究现状

1．1．1 粘孢子虫的分类系统

1．1．2 粘孢子虫的起源问题

1．1．3 粘孢子虫属阶元的归属问题

1．1．4 粘孢子虫种类的误鉴

1．2 粘孢子虫分类方法

1．2．1 形态学分类方法

1．2．2 分子生物学分类方法

1．3 研究目的

2 材料与方法

2．1 样品收集及预处理

2．2 粘孢子虫形态学研究

2．3 组织病理切片的制备和观察

2．3．1 取材和固定

2．3．2 组织脱水、透明、渗透与包埋

2．3．3 切片与摊片

2．3．4 染色、封片与结果观察

2．4 基因组DNA的提取、PCR扩增与测序

2．4．1 基因组DNA的提取

2．4．2 PCR扩增

2．4．3 PCR产物测序

2．5 系统发育分析

3 结果

3．1 苍梧碘泡虫

3．1．1 苍梧碘泡虫的形态学

3．1．2 组织切片观察

3．1．3 分子生物学分析

3．2 葡萄碘泡虫

3．2．1 葡萄碘泡虫的形态学

3．2．2 组织切片观察

3．2．3 分子生物学分析

3．3 似葡萄碘泡虫

3．3．1 似葡萄碘泡虫的形态学

3．3．2 分子生物学分析

3．4 陈马碘泡虫

3．4．1 陈马碘泡虫的形态学

3．4．2 分子生物学分析

4 讨论

4．1 苍梧碘泡虫

4．2 葡萄碘泡虫

4．3 似葡萄碘泡虫

4．4 陈马碘泡虫

参考文献

附录 研究生期间发表的论文

致谢