犊牦牛恩诺沙星口服凝胶剂的研制与评价

摘要

本试验选取淀粉、羧甲基纤维素钠(CMC)、吐温80、甘油作为主要基质，设置三个水平，进行L9(34)的正交试验，以保湿性、外观性状、耐热性和粘附力为评价指标筛选最佳配方。结果显示，四种因素影响力主次顺序为淀粉＞甘油＞ CMC＞Tween-80，最佳配比为1％ CMC、10％淀粉、15％甘油、1％吐温80。探究了使用紫外分光光度法检测口服凝胶剂中恩诺沙星含量的可行性。结果显示，恩诺沙星溶液在2.0～14.0μg/mL的浓度范围内具有良好的线性关系，标准曲线方程为Y=0.0389X+0.0019(R=0.9998);平均回收率为101.06％，RSD为0.32％;日内和日间精密度RSD均小于5％;测得口服凝胶剂的平均含量为30.43 mg/g。表明该方法到达试验检测要求，可作为恩诺沙星口服凝胶剂生产中含量检测的一种简单、经济、高效的方法。在此方法的基础上，选取3批恩诺沙星凝胶剂分别进行湿稳定性试验、热稳定性试验、耐寒试验和长期留样试验评价恩诺沙星凝胶剂的稳定性。结果显示，在75％湿度和37℃中放置30天，室温放置6个月，恩诺沙星含量无显著性(P＞0.05)变化;但凝胶剂在高湿和高温环境中粘稠度降低，有水分析出。表明恩诺沙星凝胶剂含量稳定，最佳保存条件是4℃干燥避光环境且室温下能够长期保存。
　　随机选取40头自然放养的2～3月龄犊牦牛，其中30头腹泻犊牦牛分为恩诺沙星口服凝胶治疗组、恩诺沙星注射液治疗组、腹泻对照组，每组10头;10头健康犊牦牛为健康对照组;治疗组连续给药3天。恩诺沙星凝胶组治疗前后和健康对照组采血分离血清并检测生化指标。结果显示，恩诺沙星凝胶剂和恩诺沙星注射液对犊牦牛腹泻的治愈率分别为90％和70％;有效率分别为100％和80％，均极显著高于腹泻对照组好转率(P＜0.01);治疗前TP、UA、ALP、ALT、AST与健康组相比显著降低(P＜0.05)，治疗后TP、UA、ALP、ALT、AST与健康组无显著差异(P＞0.05)，治疗后TP、ALP、AST比治疗前显著升高(P＜0.05)。试验结果表明，恩诺沙星口服凝胶剂对治疗犊牦牛腹泻效果显著，且对腹泻犊牦牛的肝、肾功能等多项血清生化指标具有良好的改善作用。
　　随机选取6头健康犊牦牛，平均分成两组，按10 mg/kg剂量分别口服恩诺沙星原粉和恩诺沙星口服凝胶剂，采用HPLC法对不同时间点的血浆药物浓度进行检测，研究恩诺沙星在犊牦牛体内的药动学。结果显示，犊牦牛口服恩诺沙星原粉和凝胶剂后，恩诺沙星的药动学参数分别为t1/2Ke=4.375±0.913 h、T(peak)=0.952±0.256 h、C(max)=1.380±0.060μg/mL、AUC=10.117±0.199(μg/mL)·h和t1/2Ke=2.201±2.860 h、T(peak)=1.961±0.086 h、C(max)=1.115±0.017μg/mL、AUC=10.970±0.334(μg/mL)·h,其中两者的t1/2Ke、T(peak)和C(max)差异极显著(P＜0.01)。表明恩诺沙星凝胶剂与原粉相比，达到药峰时间和消除半衰期长，能够在牦牛体内缓慢释放。
　　本试验又对口服恩诺沙星凝胶剂的安全性进行了评价。随机选取80只小鼠，平均分成低、中、高3个剂量组和对照组，给药组按恩诺沙星对应剂量10 mg/kg、30mg/kg、50 mg/kg灌服恩诺沙星凝胶剂，连续给药15天。于第0天、6天、11天和16天采血并分离血清，检测生化指标;于第0、6、9、11、13和16天给药前称重，记录体重变化;于第16天取各组的心肝脾肺肾称重计算脏器系数，并取肝脾肾制作病理切片。结果显示，高剂量组的TP在第16天与第0天相比显著升高(P＜0.05)，其他指标无显著差异;中剂量组小鼠在第6天和第9天体重比对照组差异显著低(P＜0.05)，高剂量组小鼠的体重从第6天开始到试验结束的第16天均显著(P＜0.05)低于对照组;各组脏器系数与对照组差异不显著;高剂量组肝脏轻微损失，其他无显著病理变化。表明恩诺沙星口服凝胶剂在推荐剂量和疗程(10 mg/kg，3～6 d)内安全无毒副作用。

目录

声明

摘要

缩略词表(Abbreviation)

1 文献综述

1．1 我国牦牛产业现状

1．2 恩诺沙星的介绍及相关研究

1．2．1 恩诺沙星的简介

1．2．2 理化性质

1．2．3 抗菌作用相关机理

1．2．4 机体内外的抗菌应用

1．2．5 恩诺沙星的药动学研究

1．2．6 制剂中恩诺沙星的检测方法

1．2．7 恩诺沙星制剂的研究进展

1．3 研究目的及意义

2 材料与方法

2．1 试验材料

2．1．1 主要试剂

2．1．2 主要仪器设备

2．1．3 试验动物

2．1．4 相关溶液配制

2．2 试验方法

2．2．1 口服凝胶剂配方的筛选及制备

2．2．2 凝胶剂含量检测方法的建立

2．2．3 恩诺沙星口服凝胶剂稳定性试验

2．2．4 药物动力学试验

2．2．5 疗效学试验

2．2．6 安全性相关探究

3 试验结果与分析

3．1 凝胶配方确定

3．2 凝胶剂含量检测方法建立结果

3．2．1 检测波长确定

3．2．2 标准曲线

3．2．3 回收率试验

3．2．4 精密度试验

3．2．5 恩诺沙星口服凝胶剂含量测定结果

3．3 恩诺沙星口服凝胶剂稳定性试验结果

3．3．1 湿稳定性结果

3．3．2 热稳定性试验

3．3．3 耐寒试验

3．3．4 长期留样试验

3．4 药动学试验结果

3．4．1 犊牦牛血中恩诺沙星检测方法的建立

3．4．2 血药浓度及药动学数据

3．5 疗效试验结果

3．5．1 临床疗效结果

3．5．2 血清生化指标测定结果

3．6 安全性试验结果

3．6．1 体重变化

3．6．2 血液生化指标分析

3．6．3 脏器系数

3．6．4 组织病理切片变化

4 讨论

4．1 恩诺沙星口服凝胶剂配方确定

4．2 关于凝胶剂含量检测方法建立的讨论

4．3 关于恩诺沙星凝胶剂稳定性的讨论

4．4 药物动力学试验讨论

4．5 临床疗效结果讨论

4．6 安全性相关试验结果讨论

5 结论

参考文献

致谢

硕士期间发表文章情况