猪源与禽源沙门菌的分离鉴定及生物学特性研究

摘要

沙门菌是肠杆菌科沙门菌属细菌，是一种重要的人兽共患病病原。在养殖业中，沙门菌是危害3月龄内仔猪和3周龄内雏禽肠道健康的一种重要的致病菌，能对养殖业的生产造成严重影响。本研究通过采集临床发病的猪和家禽的病变组织以及健康蛋鸡的泄殖腔拭子等样品，进行沙门菌的分离和鉴定，在此基础上，进行分离菌株的耐药性、耐药基因、毒力基因和生物被膜形成能力等检测，以掌握当前养殖场沙门菌的部分生物学特性及分子特征，为防控沙门菌病提供技术支撑，主要研究结果如下：
　　1.沙门菌的分离鉴定
　　本研究从临床送检的发病动物病变组织中，一共分离得到猪源沙门菌55株，禽源沙门菌5株，其中包含3株鸡源、1株鸭源和1株鹅源。另外，通过在规模化养鸡场采集3周龄健康蛋鸡的泄殖腔拭子、混合粪便和环境样品，分离得到沙门菌11株。
　　2.沙门菌分离菌株的耐药性检测
　　本研究使用微量肉汤稀释法分别对猪源和禽源分离菌株进行了12种药物的耐药性检测。结果表明，猪源沙门菌对青霉素类、氯霉素类、四环素类的药物耐药率在80％以上，对头孢菌素类、喹诺酮类、磺胺类和氨基糖苷类药物的耐药率在50%以上，对甲氧苄啶的耐药率最低，不足2%；禽源沙门菌对青霉素类药物的耐药率高于80%，对其他药物多数耐药率在50%~75%，但是对卡那霉素、多西环素和甲氧苄啶的耐药率则在50%以下。
　　本研究使用PCR方法分别对猪源和禽源分离菌株进行了23种相关耐药基因的检测，发现所分离的菌株中存在15种相关耐药基因。在猪源沙门菌中，磺胺类相关抗性基因 sul2、sul1和四环素类相关抗性基因 tetA基因的检出率分别是78.43%、60.78%和72.55%，是检出率最高的三种基因；在禽源沙门菌中，磺胺类相关抗性基因 sul1基因和氨基糖苷类相关抗性基因 aac(3')-IV基因的检出率分别是62.5%和60%，是检出率最高的两种基因。此外，通过基因测序的方式对喹诺酮类耐药决定区域的主要基因gyrA和parC进行了氨基酸突变的测序分析，结果表明，gyrA基因的主要突变发生在其氨基酸序列的第83个位点和第87个位点，parC基因的主要突变发生在其氨基酸序列的第80个位点和第129个位点。
　　3.沙门菌其他生物学特性研究
　　本研究用PCR方法检测了12种沙门菌毒力基因，发现有6种基因在猪源沙门菌中检出率在90%以上，禽源沙门菌中毒力基因 spv C检出率最高（87.5%）， sseL基因在猪源沙门菌中检出率是4.55%，在禽源沙门菌中的检出率是0，在所有毒力基因中检出率最低。
　　通过结晶紫染色法检测沙门菌的生物被膜形成能力时发现，92.73%的猪源沙门菌和31.25%的禽源沙门菌无生物被膜形成能力，50%的禽源沙门菌具有较弱的生物被膜形成能力，余下7.27%的猪源沙门菌和18.75%的禽源沙门菌具有中等的生物被膜形成能力。

目录

声明

缩略语表(Abbreviation)

1 文献综述

1.1 沙门菌的病原学简介

1.2 沙门菌的耐药性研究进展

1.3 沙门菌的毒力因子研究进展

1.4 细菌生物被膜研究进展

2 研究的目的与意义

3 材料与方法

3.1 材料

3.2方法

4 结果

4.1样品的采集

4.2 沙门菌的分离鉴定

4.3药敏试验结果

4.4耐药基因检测结果

4 .5 毒力基因检测结果

4.6 生物被膜形成能力检测结果

5 讨论

5.1 沙门菌的采样分离

5.2 沙门菌的耐药性

5.3 沙门菌毒力基因

5.4 沙门菌的生物被膜形成能力

6 结论

参考文献

个人简历

致谢