声明
摘要
缩略语表
1前言
1．1丁香假单胞菌
1．1．1丁香假单胞菌的基本特点
1．1．2丁香假单胞菌致病毒性因子
1．1．3丁香假单胞菌的主要危害
1．1．4丁香假单胞菌的防控
1．2 GntR家族转录调控因子
1．2．1 GntR家族转录调控因子简介
1．2．2 GntR家族转录调控因子C端结构域
1．2．3 GntR家族转录调控因子N端结构域
1．2．4 GntR家族转录调控因子变构和连接子的作用
1．3 GntR家族转录调控因子在假单胞菌中的研究现状
1．4课题研究的目的及意义
2材料和方法
2．1实验材料
2．1．1菌株和质粒
2．1．2引物设计
2．1．3培养基
2．1．4实验所需试剂
2．1．5实验所用仪器
2．2实验方法
2．2．1大肠杆菌和假单胞菌质粒的提取
2．2．2大肠杆菌和丁香假单胞菌基因组的提取
2．2．3 DNA体外重组
2．2．4大肠杆菌和假单胞菌的转化及筛选
2．2．5 SDS-PAGE样品制备和电泳
2．2．8大肠杆菌的诱导表达、亲和纯化
2．2．9 Real time-qPCR
2．2．10聚丙烯酰胺凝胶阻滞实验(EMSA)
2．2．11生物信息学分析
3实验结果与分析
3．1 InpR敲除后影响丁香假单胞菌MB03生长
3．1．1 InpR基因回补菌株的构建
3．1．2野生菌MB03、InpR敲除菌与回补菌株生长曲线测定
3．2 InpR调控靶基因的筛选
3．2．1 InpR潜在靶基因的筛选
3．2．2 EMSA实验验证潜在靶基因
3．3结合序列的鉴定
3．3．1结合序列的预测
3．3．2结合序列的进一步验证
3．4 RT-qPCR验证InpR对4个靶基因的调控关系
3．5探究效应因子对InpR与DNA结合活性的影响
3．6 InpR与DNA结合结构域的验证
3．6．1 InpR DNA结合结构域的蛋白表达和纯化
3．6．2 EMSA实验验证InpR-N与DNA的结合活性
3．7 InpR与DNA结合的关键氨基酸的确定
3．7．1 InpR结合DNA的氨基酸残基分析与预测
3．7．2 InpR预测与DNA结合氨基酸残基的突变
3．7．3 EMSA实验验证InpR突变蛋白的结合活性
3．8 InpR结合序列保守性分析及潜在靶基因的预测与筛选
3．8．1结合序列保守性分析
3．8．2 InpR潜在靶基因的预测与筛选
4总结与讨论
4．1总结
4．2讨论
参考文献
致谢
