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论文说明
摘要
缩略语表
第一章前言
1．1弓形虫概述
1．1．1弓形虫和弓形虫病
1．1．2弓形虫的生活史
1．1．3弓形虫的宿主范围和流行病学
1．2弓形虫分泌蛋白的研究进展
1．2．1弓形虫的分泌蛋白类型
1．2．2弓形虫完成胞内生长周期需要分泌蛋白的协助
1．2．3弓形虫依赖分泌蛋白介导与宿主的互作
1．3蛋白标记技术研究进展
1．3．2生物素标记技术及其应用
1．3．3其它标记技术
1．4蛋白质相互作用技术的研究进展
1．4．1酵母双杂交技术
1．4．2免疫共沉淀技术
1．4．3 Pull-down技术
1．4．4其它方法
1．5研究目的和意义
2．1材料与方法
2．1．1实验动物
2．1．2虫株、菌株和细胞
2．1．3质粒
2．1．4引物
2．1．5主要仪器与试剂
2．1．6主要溶液及配制
2．1．7实验方法
2．2结果与分析
2．2．1生物素标记质粒的构建
2．2．2生物素标记虫株的构建
2．2．3融合蛋白GRA1-APEX／BirA*的表达检测
2．2．4生物素标记蛋白的检测
2．2．5标记蛋白的富集纯化
2．2．6蛋白质谱分析
2．2．7新型致密颗粒蛋白的鉴定
2．2．8候选蛋白的定位分析
2．2．9致密颗粒蛋白的功能研究
2．3讨论
2．3．1诱饵蛋白的选取、表达和比较
2．3．2质谱数据的处理
2．3．3候选致密颗粒蛋白的分析
2．3．4依赖APEX和BirA*催化的生物素标记技术在弓形虫的应用
2．3．5 APEX和BirA*两方法的比较
2．4小结
第三章与棒状体蛋白ROP16互作宿主蛋白的筛选和鉴定
3．1材料与方法
3．1．1菌株和细胞
3．1．2质粒
3．1．3引物
3．1．4主要仪器与试剂
3．1．5实验方法
3．2结果与分析
3．2．1酵母双杂交诱饵质粒的构建
3．2．2诱饵质粒的自激活和毒性
3．2．3诱饵蛋白的表达检测
3．2．4互作宿主蛋白的筛选
3．2．5互作结构域的确定
3．2．6相互作用的验证
3．3讨论
3．3．1酵母双杂交系统的选择
3．3．2与ROP16互作蛋白的筛选
3．4小结
第四章结论
参考文献
致谢
附录
