声明
摘要
英文缩略表
1．1科研选题的背景
1．2细菌碳代谢物抑制研究进展
1．2．1肠杆菌的碳代谢物抑制
1．2．2枯草芽孢杆菌的碳代谢物抑制
1．2．3假单胞菌的碳代谢物抑制
1．3假单胞菌Crc蛋白介导的CCR及调控机制
1．3．1 Crc蛋白控制氨基酸的层级利用
1．3．2 Crc蛋白参与烷烃降解途径的CCR及调控机制
1．3．3 Crc蛋白参与芳香族化合物代谢CCR及调控机制
1．3．4 Crc蛋白对木糖利用的调节及其作用机制
1．4假单胞菌Crc蛋白对其他生理过程的影响
1．4．2 Crc蛋白维持细菌的代谢平衡并提高竞争力
1．4．4 Crc蛋白影响细菌的毒力和耐药性
1．5施氏假单胞菌A1501的研究进展
1．6研究目的与意义
2．1．1菌株与质粒
2．1．2培养基
2．1．3酶、试剂及试剂盒
2．2．1菌株培养条件
2．2．2 Biolog代谢谱检测
2．2．3生长曲线测定
2．2．4 HPLC测定苯甲酸的浓度
2．2．5 HPLC测定葡萄糖的浓度
2．2．6 RNA提取、体外转录及qRT-PCR
2．2．7 pGDbenR’-’lacZ融合载体构建
2．2．8 β-半乳糖苷酶活测定
2．2．9 RNA稳定性测定
2．2．10固氮酶活测定
2．2．11 ADP／ATP测定
2．2．12转录组
2．2．13蛋白质组
2．2．14 Western Blot
2．2．15反硝化测定
2．2．16根际竞争定殖实验
2．2．17趋化运动实验
2．2．18生物膜形成测定
2．2．19胁迫冲击实验
2．2．20蛋白的诱导表达
2．2．21 MST亲和力实验
3．结果与分析
3．1固氮施氏假单胞菌Crc蛋白介导的碳代谢物抑制现象
3．1．1施氏假单胞蕾A1501对不同碳源的利用情况
3．1．2固氮施氏假单胞菌crc基因的同源性分析
3．1．3混合碳源条件下野生型A1501和Δ crc对苯甲酸降解能力的分析
3．1．4混合碳源条件下野生型A1501和Δ crc对葡萄糖利用能力的分析
3．2 crc基因表达特性及其缺失对非优势碳源代谢基因表达的影响
3．2．1固氮施氏假单胞菌crc基因的表达特性
3．2．2 crc基因缺失对苯甲酸代谢途径基因表达的影响
3．2．3 crc基因缺失对葡萄糖代谢基因表达的影响
3．3碳代谢物抑制蛋白Crc对施氏假单胞菌A1501氮代谢的影响
3．3．1 Crc蛋白对施氏假单胞菌A1501生物固氮的影响
3．3．2 Crc蛋白失活对施氏假单胞菌A1501反硝化能力的影响
3．4 Crc蛋白对施氏假单胞菌A1501植物根际定殖的影响
3．4．1 Crc蛋白对施氏假单胞菌A1501运动能力的影响
3．4．2 Crc蛋白对施氏假单胞菌A1501生物膜形成能力的影响
3．4．3 Crc蛋白对施氏假单胞菌A1501胁迫抗性的影响
3．5固氮施氏假单胞菌Crc蛋白作用机制的研究
3．5．1 Crc蛋白和Hfq蛋白的表达与纯化
3．5．2 MST检测Crc蛋白与ncRNA的体外结合
3．5．3 MST检测Crc蛋白与碳代谢靶mRNA的体外结合
3．5．4 MST检测Crc蛋白与氮代谢靶mRNA的体外结合
4．主要创新点
5．结论与讨论
5．1碳代谢物抑制蛋白Crc的全局调控功能
5．2施氏假单胞菌A1501碳代谢物抑制系统的作用模型
5．3 RNA分子伴侣蛋白Hfq在碳代谢物抑制调控中的作用
5．4 Crc蛋白保守结合基序的分布规律及可能的作用机制
参考文献
攻读博士期间发表论文
致谢
