用SSH法筛选喉肿瘤组织与其周围正常组织的差异表达基因

摘要

肿瘤的发生是多基因多步骤共同作用的结果.有关喉癌的分子致病机理目前所知甚少,染色体的畸变,抑癌基因的失活,原癌基因的激活,都可能是其发病的原因之一,但尚不够全面.从分子水平上,筛选出所有喉肿瘤组织与其相邻的正常组织的差异表达基因,无疑会给人类阐明喉癌的发病机理提供更为全面更为准确的生物信息学资料.抑制消减杂交法主要应用于筛选有关疾病、组织特异性基因或其它差异表达基因.其核心是抑制性PCR为基础的消减杂交.随机挑选9个克隆通过多克隆位点进行PCR扩增,该PCR产物点在高密度尼龙膜上,以其为探针与随机引物标记的检测子或驱逐子进行反向Northern杂交,经反向Northern证实,除一个两接头相连的克隆表达无差异以上,其它八个克隆在检测子和驱逐子的表达均有质或量的差异,将表达差异的8个PCR产物测序,所得序列在GeneBank中作Blastn分析,决定每一序列所代表的基因.这八个克隆代表了六个基因和一个免疫球蛋白重链区.其假阳性率低度,说明该方法可靠,结果可信.六个基因除一个代表功能不明的新抗体外,其它基因分别为:肿瘤坏死因子、角质素、肌动蛋白、肌球蛋白以及碱性磷酸酶.它们在喉癌的发生发展、肿瘤转移、肿瘤免疫和肿瘤的检测等方面分别起着重要的作用.

目录

缩略词简表

前 言

材料和方法

方法:实验流程图

结 果

讨 论

参考文献

综 述

参考文献

致 谢