胚胎成纤维细胞支持的分化抑制培养体系对脐血造血细胞扩增的实验研究

摘要

该文分二部分:第一部分胚胎成纤维细胞支持的分化抑制培养体系对脐血造血细胞扩增的实验研究;目的:胚胎干细胞(ES)和核转移胚胎干细胞(ntES)的扩增培养需要恰当的分化和抑制培养体系,该体系主要由胚胎成纤维细胞饲养单层与添加的促进增殖抑制分化的细胞因子(SCF、LIF)构成,能维持ES细胞在不分化的前提下大量增殖.基于造血干细胞(HSC)与ES细胞的生物学特征和扩增培养的目的等方面存在共性,该研究设计了一种更符合HSC特性的分化抑制培养体系,以达到体外扩增HSC的目的,为造血干细胞移植提供更符合临床需求的移植物和HSC扩增方法.结论:人中期妊娠早期的流产胚胎能成功分离PHEF并制备饲养单层,但PHEF和PMEF的生物学特性存在差异.由鼠胚胎成纤维细胞(PMEF和STO)和PHEF构建的异源及同源共培养体系能有效扩增人脐血造血细胞,其中PHEF优于PMEF,PMEF优于STO.其扩增作用与造血细胞、饲养细胞与外源细胞因子的相互作用有关.初步观察提示该扩增体系有助于造血调控研究、造血干细胞体外操作和临床造血干细胞移植,但需进一步研究证实.第二部分脐血间充质干细胞主长特征与 诱导为心肌样细胞的实验研究;目的:脐血中存在少量的间充质干祖细胞,但对其增殖分化特性知之甚少,该研究旨在评估脐血中间充质干祖细胞存在的频率,了解脐血间充质干祖细胞的增殖特点.探讨脐血间充质干祖细胞用于心肌细胞再生的可行性,并寻找其最佳诱导培养条件.结论:低血清DMEM培养液能维持脐血间充质干祖细胞增殖分化能力.采用该文所提供的扩增与诱导条件,脐血间充质干祖细胞可得到有效扩增,并可高效向心肌样细胞分化.脐血间充质干祖细胞是又一良好的组织工程与细胞治疗的种子细胞.