激光扫描共聚焦显微镜在细胞周期研究中的应用

摘要

第一部分:激光扫描共聚焦显微镜用于蛋白质的定位和定量同步分析;目的:通过对流式细胞术(Flow Cytometry)分选(sorting)后得到不同细胞周期时相的细胞进行共聚焦形态学分析,更精确、直观、有效地进行蛋白质表达的定位和定量分析,以期为研究蛋白质的表达提供更为丰富的生物学信息.方法:采用双参数流式细胞术Cyclin A/DNA分析法将MOLT-4细胞分选出细胞周期各时相的细胞,然后利用激光共聚焦显微镜的断层显像功能进行Cyclin A的胞内定位和定量分析.结果:发现用Confocal进行蛋白质的定量分析与流式细胞术的结果有一致性,同时还能进行胞浆和胞核蛋白质表达的定位和定量同步分析.结论:激光共聚焦显微镜能有效地运用于荧光标记的蛋白质表达的定位和定量同步分析.第二部分:咖啡因解除丁酸钠对MOLT-4细胞早G<,1>期的阻滞效应;目的:观察咖啡因能否消除丁酸钠在早G<,1>期对MOLT-4细胞的阻滞效应.方法:体外培养的MOLT-4细胞与1mM的丁酸钠和咖啡因孵育,通过Sub-G<,1>法、Cyclin/DNA双参数分析法和激光共聚焦显微镜定量技术分析药物对MOLT-4细胞的细胞周期分布和细胞凋亡率以及Cyclin E、Cyclin D<'3>表达的影响.结果:丁酸钠能够诱导MOLT-4细胞的G<,1>期阻滞(伴随凋亡)伴有Cyclin E表达降低和Cyclin D<'3>过度表达,而经咖啡因干预后丁酸钠的阻滞可以被解除.结论:咖啡因能够解除丁酸钠在早G<,1>期对MOLT-4细胞的阻滞,该结论对于预防癌症具有现实的参考意义.

目录

第一部分：激光扫描共聚焦显微镜用于蛋白质的定位和定量同步分析

前 言

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

第二部分：咖啡因解除丁酸钠对MOLT-4细胞早G1期的阻滞效应

前 言

材料和方法

结 果

讨 论

参考文献

文献综述

致 谢