p,p’-DDE对离体培养大鼠支持细胞转铁蛋白和雄激素结合蛋白基因表达的影响

摘要

该研究试图建立大鼠睾丸支持细胞体外培养模型,研究DDT的主要代谢产物p,p'-DDE对支持细胞几种重要功能基因表达的影响,探讨p,p'-DDE对支持细胞的基因组效应,进而研究p,p'-DDE导致生精障碍的可能作用机制.第一部分 大鼠睾丸支持细胞离体培养方法及p,p'-DDE的毒性作用 建立大鼠睾丸支持细胞体外原代培养模型,18-20日龄SD大鼠睾丸经胰蛋白酶和胶原酶依次消化,分离和纯化支持细胞.在5％CO2,35℃条件下进行培养,并经富尔根染色进行支持细胞鉴定.第二部分P,P,-DDE对支持细胞转铁蛋白和雄激素结合蛋白基因表达的影响为p,p'-DDE对支持细胞基因转铁蛋白和雄激素结合蛋白基因转录的影响,该研究对离体原代培养的大鼠支持细胞给予不同剂量(DMSO为对照,p,p'-DDE剂量分别为10、30、50μmol/L)的p,p'-DDE染毒24h,提取细胞内总RNA,以β-actin为内对照,用一步法RT-PCR检测支持细胞内转铁蛋白和雄激素结合蛋白mRNA水平.结果表明p,p'-DDE可导致支持细胞的基因表达异常,转铁蛋白的表达明显降低可能是导致生精过程障碍的重要机制,而支持细胞细胞也可能产生一定的保护性适应,如促进雄激素结合蛋白的表达以结合更多的雄激素来维持生精过程.综上所述,该研究结果表明:1.建立的支持细胞离体原代培养方法是可行的;2.p,p'-DDE对支持细胞的最大无细胞毒性作用剂量为50μmol/L;3.p,p'-DDE可以抑制支持细胞转铁蛋白基因的转录表达;4.支持细胞p,p'-DDE的作用下可以高表达雄激素结合蛋白;4.p,p'-DDE对支持细胞的基因组效应是比较复杂的,这种复杂的基因组效应与其抗雄激素作用有关.尽管该研究取得了一些初步成果,但还有待进一步的深入研究,如:1.p,p'-DDE对支持细胞的一些重要功能基因表达包括转录、翻译多个环节的影响;2.不同表达的功能基因之间的相互作用及其调控机制;3.FSH(卵泡刺激素)、T(睾酮)等激素在p,p'-DDE致支持细胞基因异常表达中的作用及其途径等.

目录

略语及试剂中英文对照表

前言

第一部分大鼠睾丸支持细胞离体培养方法及p,p'-DDE的毒性作用

1大鼠睾丸支持细胞的原代培养

2支持细胞Feulgen染色鉴定

3 p,p'-DDE对支持细胞的毒性试验

4结果与讨论

第二部分p,p'-DDE对支持细胞转铁蛋白和雄激素结合蛋白基因表达的影响

1材料与方法

2结果

3讨论

小结

参考文献

综述：DDT的环境毒理学研究进展

附录

致谢