TLR4在糖尿病肾病发生发展中的作用及氯沙坦对其肾内表达的影响

摘要

本研究分为二部分：第一部分：TOLL样受体4在糖尿病肾病中的表达变化及其临床意义
　　 目的：观察糖尿病肾病（diabetic nephropathy DN）大鼠肾组织中TOLL受体4（Toll-like receptor4 TLR4）的表达变化情况，并对TLR4在DN发生发展中所起的可能作用进行初步的探讨。
　　 方法：试验分两组－模型组和对造组。模型组大鼠应用腹腔内一次性大剂量注射链脲佐菌素（streptozoticin STZ）溶液制作糖尿病模型，而对造组仅给予腹腔注射不含STZ的溶液。于造模成功后2w、4w、6w、8w、12w分别测定模型组和对造组24h尿蛋白排泄量、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、肾重/体重（KW/BW）、尿白蛋白/肌酐比值（A/C）、血清CRP及TNF-α滴度；观察肾脏损伤后病理形态学变化并测定细胞外基质增生程度；RT-PCR法测定肾组织TLR4的mRNA表达；免疫组化法检测肾组织TLR4、核因子кB（NF-кB）、生长转化因子-β1（transforming growth factor-β1 TGF-β1）、纤维连接蛋白（fibronectin FN）的蛋白表达。
　　 结果：糖尿病大鼠2w后即发现24h尿蛋白排泄量增加等早期肾脏病征象，此时肾组织TLR4以及NF-кB表达即开始增加，与对照组相比，差异具有显著性，并随病变程度的加重呈持续性增加。12w时试验大鼠相关炎症介质的血清滴度明显增高，并出现肾组织纤维化及肾功能损伤。相关性分析提示TLR4的表达与炎症反应程度、肾组织纤维化程度及肾功能损伤程度均呈显著正相关。
　　 结论：TLR4及其信号传导通路可能通过激活免疫炎症反应参与了糖尿病肾病的发生和发展。
　　 第二部分：氯沙坦对糖尿病肾病大鼠的炎症抑制作用
　　 目的：观察氯沙坦对糖尿病肾病大鼠的炎症抑制作用。
　　 方法：采用链脲佐菌素（streptozotocin STZ，65mg·kg-1）腹腔注射建立糖尿病大鼠模型。试验分3组：对照组、模型组、治疗组，后一组于成模后一周给予氯沙坦20mg·kg-1·d-1灌胃。分别测定对照组和模型组4、8、12周24h尿蛋白、尿白蛋白/肌酐比值（A/C）、血CRP及TNF-α水平；观察肾脏病理形态学变化；应用免疫组化法检测肾组织TOLL样受体4（TLR4）、核因子-кB（NF-кB）的蛋白表达；应用RT-PCR法测定肾组织TLR4的核酸表达；12周后测定治疗组的上述指标。
　　 结果：模型组与对照组相比：模型组大鼠24h尿蛋白、A/C、血CRP及TNF-α含量显著增高；肾组织TLR4、NF-кB的表达明显增加。相关性分析提示TLR4的表达与NF-кB的表达、24h尿蛋白、A/C、血CRP及TNF-α含量均呈正相关关系。氯沙坦治疗组大鼠较模型组大鼠24h尿蛋白、A/C、血CRP、TNF-α含量下降，肾组织TLR4、NF-кB的表达亦减弱，治疗前后比较存在差异（P<0.05）。
　　 结论：氯沙坦对糖尿病肾病具有保护作用，部分作用机制可能是通过下调NF-кB、TLR4的表达，降低血CRP、TNF-α含量，抑制炎症反应而实现的。