CpG-ODN对Hela细胞FasL/Fas凋亡途径影响的实验研究

摘要

目的: 观察CpG-ODN对HeLa细胞和Jurkat细胞FasL、Fas mRNA表达水平的影响，筛选CpG-ODN与HeLa和Jurkat细胞的最适工作浓度和最适作用时间，在最适工作浓度和最适作用时间条件下观察CpG-ODN对HeLa和Jurkat细胞凋亡的影响。
　　 方法: 不同浓度的CpG-ODN(M362)体外孵育HeLa和Jurkat细胞12小时后实时荧光RT-PCR检测FasL、Fas mRNA的表达水平，由此决定CpG-ODN的最适工作浓度；在最适工作浓度时，M362体外孵育HeLa和Jurkat细胞4、12、24、36、48小时后实时荧光RT-PCR检测FasL、Fas mRNA的水平，由此决定CpG-ODN的最适作用时间；应用HeLa细胞与Jurkat细胞共培养的方法体外研究CpG-ODN对HeLa细胞和Jurkat细胞相互作用中FasL-Fas途径所致细胞凋亡的作用。
　　 结果:
　　 ① CpG-ODN的作用呈浓度依赖性。与对照组相比，CpG-ODN的浓度为0.001μmol/L、0.01μmol/L、0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L时，HeLa和Jurkat细胞与M362作用12h后处理组FasL mRNA的rER值的差异在CpG-ODN的浓度为0.001μmol/L、0.01μmol/L不具有统计学意义(p>0.05)，在CpG-ODN的浓度为0.1μmol/L、1μmol/L和10μmol/L时，差异有统计学意义(p<0.05)，在处理组1μmol/L和10μmol/L之间的差别不具统计学意义。
　　 ② CpG-ODN的作用呈时间依赖性。与时间点0小时相比，CpG-ODN的浓度为最适浓度1μmol/L时，HeLa和Jurkat细胞与M362作用4、12、24、36、48小时后FasL mRNA的rER值在12、24、36、48小时处均有统计学差异(p<0.05)，在4小时处没有统计学意义；与时间点24小时相比，36、48小时处均没有统计学差异。
　　 ③ CpG-ODN能不同程度的下调HeLa和Jurkat细胞FasLmRNA的表达。1μmol/L的M362与HeLa和Jurkat细胞作用24小时后FasL mRNA的rER值均有所下降，且HeLa细胞的下降幅度比Jurkat细胞大，与作用前相比，差别有统计学意义(p<0.05)。
　　 ④ CpG-ODN对HeLa和Jurkat细胞Fas mRNA的表达水平没有影响。1μmol/L的M362与HeLa和Jurkat细胞作用24小时后Fas mRNA的rER值变化不一，与作用前相比差别均不具有统计学意义(p>0.05)。
　　 ⑤ CpG-ODN能减少HeLa诱导的Jurkat细胞凋亡。CpG-ODN预处理的HeLa细胞与Jurkat细胞共培养后Jurkat细胞凋亡率为(6.41 2.81)%，而没有用CpG-ODN预处理的HeLa细胞与Jurkat细胞共培养Jurkat细胞凋亡率为(29.23 6.85)%，二者的差别有统计学意义(p<0.05)。
　　 结论: CpG-ODN的作用是时间和剂量依赖性的，HeLa细胞可能通过表达FasL主动诱导T淋巴细胞凋亡从而在肿瘤的免疫逃逸中发挥作用，CpG-ODN可通过下调FasL的表达而减少肿瘤细胞主动诱导的T淋巴细胞凋亡。